老哥俱乐部

实验报告
：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4

、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1

、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min

，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4

、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5

、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

人肺大静脉内皮分离自肺大静脉组织；肺大静脉在用肺呼吸的脊椎动物中
，把动脉血由肺送回心脏的静脉
，是一个静脉里流动脉血的血管。左右1对
，共4条
，两条连接右肺，两条连接左肺。肺静脉异位引流是指肺静脉未能直接与左心房连接，而与右心房或体静脉系统连接的先天性心血管异位
。肺静脉淤血性肺动脉高压
，是由于肺静脉内血液淤滞而引起的肺动脉高压。正常情况下
，肺循环具有血压低、阻力小和顺应性大的特点，肺动脉压力高低取决于单位时间内肺动脉血流量和肺血管的阻力
，要维持肺循环的低压
、低阻的状态
，必须保证整个肺循环系统的畅通无阻，血液顺利地由肺动脉经毛细血管进入肺静脉
，再入左心室

，经过左心室收缩进入体循环，才能避免肺动脉内压力升高。细胞呈多边形鹅卵石状排列；该细胞在维持血管内外的动态平衡、合成和分泌细胞因子和介质、维持凝血和纤溶的动态平衡中起重要作用
。

方法简介：

公司实验室分离的人肺大静脉内皮采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的人肺大静脉内皮经CD31免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml）
，明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气

，95%；CO2，5%

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流

。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

大鼠骨形成蛋白6(BMP6)检测试剂盒 ，英文名： BMP6 ELISA Kit

People aminoterminal propeptide of type III procollagen (P III ) ELISA Kit 人Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢ)检测试剂盒

RatAngiotensinconveingenzyme,ACEELISAKit 大鼠血管紧张素转化酶(ACE)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforEMAIgA(Humanai-EndomysialAibodyIgA)ELISAKit人抗肌内膜抗体IgA

细胞内核酸氧化8-羟基鸟苷(8-OHG流式细胞分析试剂盒10次

RatIerleukin8,IL-8ELISAKit大鼠白介素8(IL-8/CXCL8)检测试剂盒规格：96T/48T

TNFRSF19重组小鼠 TNFRSF19 / TROY 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

CD19(B-lymphocyte antigen CD19 0.5mgCD19(B-lymphocyte antigen CD19) CD19

TXNDC17重组人 TXNDC17 / TRP14 / TXNL5 蛋白 Protein

CDK7 & CCNH & MNAT1 Protein Human 重组人 CDK7 & CCNH & MNAT1 Heterotrimer 蛋白

SELP Protein Rat 重组大鼠 SELP / selectin P / P-selectin 蛋白

CD19(B-lymphocyte antigen CD19 0.5mgCD19(B-lymphocyte antigen CD19) CD19

CDK7 & CCNH & MNAT1 Protein Human 重组人 CDK7 & CCNH & MNAT1 Heterotrimer 蛋白

TNFRSF19重组小鼠 TNFRSF19 / TROY 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

SELP Protein Rat 重组大鼠 SELP / selectin P / P-selectin 蛋白

TXNDC17重组人 TXNDC17 / TRP14 / TXNL5 蛋白 Protein

小鼠(VE)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat CrossLaps ELISA Kit (Cr) 大鼠骨胶原交联(Cr)检测试剂盒

Humansorbitoldehydrogenase,SDHELISAKit 人脱轻酶(SDH)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

ChickenIerleukin6,IL-6检测试剂盒鸡白介素6(IL-6)检测试剂盒规格：96T/48T

载玻片细胞IL蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次

Mouseglucocoicoidreceptor,GRELISAKit小鼠糖皮质类固醇受体(GR)检测试剂盒规格
：96T/48T

人肺大静脉内皮细胞小鼠细胞色素P450(mouse Cytochrome P450)   作用
：   ELISA   规格
：      进口分装

小鼠C反应蛋白(mouse CRP)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠CXC趋化因子受体3(mouse CXCR3)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠CXC趋化因子配体16(mouse CXCL16)   作用：   ELISA   规格
：      进口分装