老哥俱乐部

细胞简介：

人鼻黏膜上皮分离自鼻黏膜组织；黏膜是覆盖在人体内消化、呼吸
、泌尿、生殖等器官管腔内壁的一层组织结构，由上皮组织和疏松结缔组织构成。根据部位不同
，有口腔黏膜
、胃肠黏膜
、鼻腔黏膜、气管黏膜、阴道黏膜、眼睑黏膜等不同名称
。它们的结构也因功能
、部位不一而不尽相同。鼻腔黏膜，简称鼻黏膜
，覆盖于鼻腔表面，黏膜下方为软骨、骨或骨骼肌。根据结构与功能的不同，鼻黏膜又分为前庭部
、呼吸部和嗅部三部分。前庭部是邻近外鼻孔的部分，有丰富的鼻毛可以阻挡空气中较大的尘粒吸入。呼吸部占鼻黏膜的大部，有发达的上皮纤毛
，它们可向咽部摆动，黏着有尘粒、细菌的黏液排向咽部，终将它们排出体外。此外

，此部分有丰富的血管与腺体，对吸入的空气有加温和湿润作用。嗅部黏膜范围较小，主要位于鼻腔顶部
。它含有一种专司嗅觉的嗅细胞及嗅腺，它们分泌能溶解到达嗅区的含气味的微粒，刺激嗅细胞表面上的嗅毛产生嗅觉，而且还由于嗅细胞具有不同的受体，可分别接受不同化学分子的刺激
，因此可产生不同的嗅觉。

方法简介：

实验室分离的人鼻黏膜上皮采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法
，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的人鼻黏膜上皮经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上

，且不含有HIV-1
、HBV

、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息：

包被条件
：鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基：含FBS、EGF、Hydrocortisone、肾上腺素
、甲状腺素、Insulin、Transferrin、Selenium Solution
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态
：上皮细胞样

传代特性
：可传1-2代左右

消化液

：0.25%

培养条件：气相：空气
，95%；CO2
，5%

人鼻黏膜上皮体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养
，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小

；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置

，重复此步骤2-3次

，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬

，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min

；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

人脂肪酶(Lipase)ELISA 试剂盒

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注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系

。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面


，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注

：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞

，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。