實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

雞脂肪幹分離自脂肪組織 ；脂肪組織主要由大量群集的脂肪細胞構成 ，聚集成 團 的脂肪細胞由薄層疏鬆結締組織分隔成小葉 ；貯存的脂肪 ，在需要時可迅速分解成甘油和 脂肪酸 ，經血液輸送到各組織以供利用 。它們影響胰島素敏感性 、血壓水平 、內皮功能  、 纖溶活動及炎症反應 ，參與多種重要病理生理過程 ；脂肪組織已由過去單純作為能量儲存 的器官而成為一個極其重要的內分泌係統 。脂肪幹細胞(ADSCs)是一種具有多向分化潛能 的幹細胞 ，主要恢複組織細胞的修複功能 ，促進細胞的再生 ，恢複年輕麵容的同時 ，身體 機能也得到充分改善 ，有效改善亞健康 、早衰等疾病 ，由內而外真正的有效抵抗衰老 。脂 肪幹細胞具有很多優點 ：①具有自我更新及多向分化的潛能 ；②來源充足 ；③對供區的創 傷較小 ；④獲得率及體外擴增速率高 。脂肪幹細胞是目前被廣泛應用於組織工程領域中理 想的種子細胞 。

方法簡介 ：

實驗室分離的雞脂肪幹采用膠原酶消化法製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的雞脂肪幹經CD90免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不 含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息：

培養基 ：基礎培養基 ，含FBS 、EGF 、bFGF 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：成纖維細胞樣

傳代特性 ：可傳3代左右

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

雞脂肪幹體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠白介素26(IL-26)檢測試劑盒  ，英文名： IL-26 ELISA Kit

Mouse leukoiene C4 (LTC4) ELISA Kit 小鼠白三烯C4(LTC4)檢測試劑盒

ELISA 小鼠IgG(mouse IgG)  進口分裝

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通用型果膠生物酶比色法定量檢測試劑盒20次

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IL17A重組絨猴 IL17 / IL17A 蛋白 Protein

Nociceptin 孤菲肽(痛敏肽 0.2mgNociceptin 孤菲肽(痛敏肽)(抗原)

CSNK2A2重組人 CSNK2A2 / CK2A2 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

EMC8 Protein Human 重組人 EMC8 / COX4NB / NOC4 蛋白

SELP Protein Mouse 重組小鼠 SELP / selectin P / P-selectin 蛋白

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小鼠堿性成纖維細胞生長因子9(bFGF-9)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human bactericidal peptide (cecropin) ELISA Kit 人殺菌肽(cecropin)檢測試劑盒

HumancecropinELISAKit 人殺菌肽(cecropin)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanai-EndomysialAibodyIgA,EMAIgA檢測試劑盒人抗肌內膜抗體IgA(EMAIgA)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

植物甲基化組蛋白H3-K9染色質免疫沉澱分析(CHIP)試劑盒10次

Humanvoltage-gatedcalciumchannel,VGCCELISAKit人鈣離子通道抗體(VGCC)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

雞脂肪幹細胞小鼠促卵泡素(FSH)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠促甲狀腺素釋放激素(H)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠促甲狀腺素(TSH)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠促黃體激素(LH)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝