老哥俱乐部

细胞简介：

鸡滑膜分离自滑膜组织；滑膜组织是位于关节腔内面的内衬结构

，各种关节内疾病均会累及滑膜。而滑膜细胞是维持关节正常功能的重要组织结构，同时在各种关节疾患中也是主要病变部位
。骨关节炎（OA）以关节软骨退行性变为特征，其病理改变累及关节的各个组成部分，但绝不仅局限于软骨
，还包括软骨下骨

、滑膜
、半月板和韧带。各组成部分的病理改变相互影响
，相互作用，共同加速关节的退变
。滑膜细胞是构成滑膜层的大细胞群体
，是维持关节正常功能的重要组织结构
，它包埋在颗粒状无定性的基质中，基质内有分散的纤维分布。滑膜由A型（巨噬样滑膜细胞）
、B型（成纤维样滑膜细胞）以及C型（树突细胞样滑膜细胞）细胞组成。滑膜细胞主要功能：①滑膜细胞产生润滑液成分，并且与关节腔的吸收和血液/润滑液交换有关；②滑膜细胞增生，表现为不依赖于支持物生长，并且分泌大量的效应分子来促进炎症和关节损坏；③是自身自分泌和旁分泌网络中效应因子的一部分。

方法简介：

实验室分离的鸡滑膜采用混合酶消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶
。

质量检测

实验室分离的鸡滑膜经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息：

培养基
：含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传3代左右

消化液
：0.25%

培养条件：气相：空气，95%
；CO2
，5%

鸡滑膜体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养
，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小

；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min

，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液

，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠粘蛋白1(MUC1)检测试剂盒 ，英文名： MUC1 ELISA Kit

Mouse lymphocyte function associated aigen 3 (LFA-3/CD58) ELISA Kit 小鼠淋巴细胞功能相关抗原3(LFA-3/CD58)检测试剂盒

MouseIerleukin1α,IL-1αELISAkit 小鼠白介素1α(IL-1α)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanghcagons-likepepfide1,GLP-1ELISAKit人胰高血糖素样肽1

吸烟者人体肺组织S9组分(5毫克/毫升)500微升

ELISAKitSDF-1β/CXCL12大鼠基质细胞衍生因子1β

CXCL13重组狗 CXCL13 / BCA-1 蛋白 Protein

N-ras 原癌基因抗原 0.5mgN-ras 原癌基因抗原

NTRK1重组人 TrkA / NTRK1 蛋白 (aa 194-413, His 标签) Protein

EGFL6 Protein Human 重组人 EGFL6 / EGF-L6 蛋白

FAM3D Protein Mouse 重组小鼠 FAM3D / Oit1 蛋白 (Fc 标签)

N-ras 原癌基因抗原 0.5mgN-ras 原癌基因抗原

EGFL6 Protein Human 重组人 EGFL6 / EGF-L6 蛋白

CXCL13重组狗 CXCL13 / BCA-1 蛋白 Protein

FAM3D Protein Mouse 重组小鼠 FAM3D / Oit1 蛋白 (Fc 标签)

NTRK1重组人 TrkA / NTRK1 蛋白 (aa 194-413, His 标签) Protein

小鼠胶原酶II(Collagenase II)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat ai endomeial aibody (EMAb) ELISA Kit 大鼠抗子宫内膜抗体(EMAb)检测试剂盒

HumanIg-likeanscriptsReceptor,ILTsRELISAKit 样转录体受体(ILTsR/LIR/CD85)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanai-cyclicciullinatedpeptide,CCP检测试剂盒人抗环胍肽抗体(CCP)检测试剂盒规格：96T/48T

植物活性线粒体分离试剂盒10次

Humanα1-microglobulin,α1-MGELISAKit人α1微球蛋白(α1-MG)检测试剂盒规格：96T/48T

鸡滑膜细胞小鼠单核细胞趋化蛋白4检测试剂盒   小鼠单核细胞趋化蛋白4试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠单核细胞趋化蛋白4试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装）
，产品别名：小鼠单核细胞趋化蛋白4试剂盒、小鼠单核细胞趋化蛋白4eisa试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠酯转移蛋白检测试剂盒   小鼠酯转移蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠酯转移蛋白试剂盒
，规格型号
：96T/48T，来源
：检测试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠酯转移蛋白试剂盒
、小鼠酯转移蛋白eisa试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期
：6个月
。

小鼠胆囊收缩素检测试剂盒   小鼠胆囊收缩素试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠胆囊收缩素试剂盒，规格型号

：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装）
，产品别名：小鼠胆囊收缩素试剂盒
、小鼠胆囊收缩素eisa试剂盒   保存条件

：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠二肽基肽酶检测试剂盒   小鼠二肽基肽酶试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠二肽基肽酶试剂盒，规格型号
：96T/48T，来源
：检测试剂盒（进口分装）

，产品别名

：小鼠二肽基肽酶试剂盒、小鼠二肽基肽酶eisa试剂盒   保存条件

：2-8℃   保质期
：6个月。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等

，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象

。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞

，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系

，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。