實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

大鼠陰道壁成纖維分離自陰道組織 ；陰道位於膀胱 、尿道和直腸之間 ，是一個富有彈性的管狀器官 。它在人類生殖過程中具有多種生理功能 ，是連接子宮與外陰的通道 ，是排出月經血 、娩出嬰兒的必經之路 ，也是一個重要的性交器官 。陰道壁按組織學由外到內分三層 ，即黏膜層 、肌層和外膜 。1）黏膜層由上皮和固有膜組成 。上皮較厚 ，為複層鱗狀上皮 ，從基底層到表層由基底層 、旁基底層 、中間層和表層組成 。沒有角化層 。陰道粘膜的基底層呈細波紋狀起伏 。2）肌層由平滑肌組織構成 ，肌束排列不規則 ，縱行和環形互相交錯 。肌束間有較多的結締組織和彈性纖維 。陰道外口有環形的橫紋肌稱括約肌 。3）外膜層為纖維膜 ，由結締組織構成 ，內含豐富的彈性纖維 、靜脈叢 、淋巴管和神經 。大鼠陰道壁成纖維細胞主要分離自外膜層 ，成纖維細胞（Fibroblast）是疏鬆結締組織的主要細胞成分 ，由胚胎時期的間充質細胞分化而來 。成纖維細胞較大 ，輪廓清楚 ，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構 ，其細胞核呈規則的卵圓形 ，核仁大而明顯 。成纖維細胞功能活動旺盛 ，細胞質嗜弱堿性 ，具明顯的蛋白質合成和分泌活動 ，在一定條件下 ，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化 ；成纖維細胞對不同程度的細胞變性 、壞死和組織缺損的修複有著十分重要的作用 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的大鼠陰道壁成纖維采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠陰道壁成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳3-5代左右 ；3代以內狀態佳

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠低密度脂蛋白免疫複合物(LDL-IC)檢測試劑盒  ，英文名： LDL-IC ELISA Kit

Pig hea muscle oponin I (cTn- I) ELISA Kit 豬心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)檢測試劑盒

鉤端核酸檢測試劑盒(熒光PCR法) 48T

CLIAKitforLR/Ob-R(HumanLeptieceptor)ELISAKIT人苗條素受體

通用封阻緩衝液100毫升

ELISAKitAT-Ⅲ雞抗Ⅲ抗體

MPL重組大鼠 c-MPL / CD110 / TPOR 蛋白 Protein

E.coli DH-5 Alpha(E.coli DH-5 Alpha Protein 0.5mgE.coli DH-5 Alpha(E.coli DH-5 Alpha Protein) DH 5 alpha 大腸杆菌菌體蛋白

LTF重組人 Lactotransferrin / LTF 蛋白 Protein

CD8B Protein Human 重組人 CD8B / P37 / LEU2 蛋白 (Fc 標簽)

IFNAR1 Protein Mouse 重組小鼠 IFNAR1 / IFNAR 蛋白

E.coli DH-5 Alpha(E.coli DH-5 Alpha Protein 0.5mgE.coli DH-5 Alpha(E.coli DH-5 Alpha Protein) DH 5 alpha 大腸杆菌菌體蛋白

CD8B Protein Human 重組人 CD8B / P37 / LEU2 蛋白 (Fc 標簽)

MPL重組大鼠 c-MPL / CD110 / TPOR 蛋白 Protein

IFNAR1 Protein Mouse 重組小鼠 IFNAR1 / IFNAR 蛋白

LTF重組人 Lactotransferrin / LTF 蛋白 Protein

小鼠纖維蛋白肽B(FPB)檢測試劑盒 96T/48T

Human leucine aminopepridase (LAP) ELISA Kit 人亮氨酰氨基肽酶(LAP)檢測試劑盒

Humanlipoteichoicacids,LTAELISAKit 人脂0壁酸(LTA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

ChickenfactorB,BF檢測試劑盒雞B因子(BF)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

載玻片細胞CASPASE-4蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

MousehepatitisBviruseaibody,HBeAbELISAKit小鼠乙型肝e抗體(HBeAb)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

大鼠陰道壁成纖維細胞小鼠血管內皮細胞生長因子B(mouse VEGF-B)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

小鼠血管內皮細胞生長因子C(mouse VEGF-C)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

小鼠血管內皮細胞生長因子D(mouse VEGF-D)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

小鼠血管內皮細胞生長因子受體1(mouse VEGF-R1)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝