老哥俱乐部

细胞简介
：

大鼠胰腺星状分离自胰腺组织；胰腺分为外分泌腺和内分泌腺两部分
。外分泌腺由腺泡和腺管组成
，腺泡分泌胰液
，腺管是胰液排出的通道
。胰液中含有、原
、脂肪酶、等
。胰液通过胰腺管排入十二指肠，有消化蛋白质、脂肪和糖的作用。内分泌腺由大小不同的细胞团──胰岛所组成
，胰岛主要由4种细胞组成：α细胞
、β细胞、γ细胞及PP细胞。α细胞分泌胰高血糖素，升高血糖；β细胞分泌胰岛素

，降低血糖；γ细胞分泌，以旁分泌的方式抑制α
、β细胞的分泌；PP细胞分泌胰多肽，抑制胃肠运动
、胰液分泌和胆囊收缩。纤维化是慢性胰腺炎的典型病理特征
，活化的胰腺星状细胞（PSC）是胰腺纤维化的主要效应细胞，PSC分离和成功培养是体外研究胰腺纤维化的重要前提。未活性化的PSC胞浆中富含维A脂滴，并表达Desmin蛋白
，活化后的PSC则表达α-平滑肌肌动蛋白（alpha-SMA）
。PSC具有静息态与激活态两种
，并分别具有特异的标志物

。静息状态PSC胞质内富含的脂滴可以被油红O染成红色

，阳性表达Desmin。激活状态PSC阳性表达alpha-SMA。油红O染色发现
，原代分离的细胞培养6d

，胞浆中仍可见明显的脂滴
，传代后，橙红色的脂滴颗粒显著减少甚至消失。免疫细胞化学染色显示，细胞接种24h仍然表达Desmin，48h后Desmin基本不再表达。培养48h后绝大多数细胞开始表达alpha-SMA
，随着培养时间的增长和传代次数的增加，细胞表达alpha-SMA
，而不再表达Desmin，说明细胞活化。提示PSC接种24h后即启动了激活过程
，至培养第6d大多数细胞激活，传代后细胞处于高度激活状态。原代胰腺星状细胞可作为慢性胰腺炎新药的细胞筛选模型

，目前研究发现：胰腺受损时，在各种刺激因子作用下使胰腺星状细胞活化
，导致细胞形态、功能发生变化，促使基质增生、胶原蛋白的大量生成及不规则沉积。

方法简介
：

公司实验室分离的大鼠胰腺星状采用胶原酶制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠胰腺星状经α-SMA
、Desmin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体

、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%
；CO2，5%

实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液

，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液

，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定


：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6
、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品
：

小鼠可溶性坏死因子-α受体   英文名称
：   soluble tumor necrosis factor receptor 1   规格：      英文缩写：   Stnf-αR

小鼠组织多肽抗原   英文名称
：   Tissue Polypeptide Aigen   规格：      英文缩写：   TPA

小鼠血小板生成素   英文名称：   Thromboietin   规格：      英文缩写
：   TPO

小鼠坏死因子相关凋亡诱导配体   英文名称：   tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand   规格：      英文缩写
：   AIL/APO 2L

小鼠Ⅷ相关抗原(FⅧ-Ag)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human coagulation factor IX (F IX) ELISA Kit 人Ⅸ(FⅨ)试剂盒

Humanlowmolecular-weightprotein/proteasomebeta-typesubunit,LMP7/PSMB9ELISAKit 人低分子质量蛋白7/β型蛋白酶体9(LMP7/PSMB9)试剂盒 96T/48T 进口分装

Human17-Hydroxyprogesterone,17-OHP试剂盒人17羟孕同(17-OHP)试剂盒规格：96T/48T

真菌/酵母细胞线粒体损伤/氧化(NAO)荧光测定试剂盒20/200次

MouseAquaporin0,AQP-0ELISAKit小鼠水通道蛋白0(AQP-0)试剂盒规格：96T/48T

PTPRC重组小鼠 CD45 / PTPRC 蛋白 (aa 453-1152, His & GST 标签) Protein

钙结合蛋白(CR)重组蛋白 Recombinant Calretinin (CR)

CRIPT重组人 CRIPT / cysteine-rich PDZ-binding 蛋白 Protein

CSNK1A1 Protein Human 重组人 CSNK1A1 / CKI-alpha / CK1 蛋白 (GST 标签)

IL13 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 IL13 / ALRH 蛋白

UL16结合蛋白2(ULBP2)重组蛋白 Recombinant UL16 Binding Brotein 2 (ULBP2)

CSNK1A1 Protein Human 重组人 CSNK1A1 / CKI-alpha / CK1 蛋白 (GST 标签)

CD84重组小鼠 CD84 蛋白 Protein

EPCAM Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 / 恒河猴 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白 (Fc 标签)

EPHA3重组人 EphA3 蛋白 Protein

大鼠胰腺星状细胞大鼠中性粒细胞明胶酶关联脂质运载蛋白(NGAL)试剂盒 ，英文名： NGAL ELISA Kit

Mouse soluble cell differeiation aigen 40 Ligand (sCD40L) ELISA Kit 小鼠可溶性白细胞分化抗原40配体(sCD40L)试剂盒

MouseFactor-relatedApoptosisligand,FASLELISAKit 小鼠凋亡相关因子配体(FASL)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanHypotheticalproteinLOC677168ELISAKit人假定蛋白LOC677168

B12比色法定量试剂盒20次

ELISAKitHpt/HP大鼠结合珠蛋白/触珠蛋白

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片

，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注

：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞

，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。