老哥俱乐部

实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次

，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ 

，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定

：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min

，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6
、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

大鼠胰腺导管上皮分离自胰腺组织
；胰腺分为外分泌腺和内分泌腺两部分
。外分泌腺由腺泡和腺管组成，腺泡分泌胰液
，腺管是胰液排出的通道。胰液中含有、原、脂肪酶
、等。胰液通过胰腺管排入十二指肠
，有消化蛋白质

、脂肪和糖的作用。内分泌腺由大小不同的细胞团──胰岛所组成，胰岛主要由4种细胞组成：α细胞
、β细胞
、γ细胞及PP细胞。α细胞分泌胰高血糖素
，升高血糖
；β细胞分泌胰岛素，降低血糖；γ细胞分泌
，以旁分泌的方式抑制α、β细胞的分泌；PP细胞分泌胰多肽，抑制胃肠运动、胰液分泌和胆囊收缩


。成体胰腺导管上皮细胞作为胰腺前体细胞，已证实具多向分化潜能，在合适的外源性刺激下可分化成胰岛样细胞
，胰腺导管上皮细胞转分化的胰岛样细胞免疫原性如何
，转分化的胰岛样细胞在治疗糖尿病时是否发生免疫排斥反应，对干细胞临床治疗糖尿病具有重要意义
。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠胰腺导管上皮采用-胶原酶混合消化法结合密度梯度离心法、差速贴壁法
，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠胰腺导管上皮经Cytokeratin-19免疫荧光鉴定

，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%
；CO2
，5%

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化

，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片

，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

大鼠甘油-3-0酸脱氢酶(GAPDH)检测试剂盒
，英文名

： GAPDH ELISA Kit

Pig superoxide dismase (SOD) ELISA Kit 猪超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒

流行性腮腺病毒(MV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CLIAKitforM-CSF(MouseMacrophageColony-StimulatingFactor)ELISAKit小鼠巨噬细胞集落刺激因子

体液氏菌(SalmonellaTyphi)定性试剂盒20次

ELISAKitMHC绵羊主要组织相容性复合体

CD38重组人 SCARB3 蛋白 Protein

胰岛素样生长因子2-mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)重组蛋白 Recombinant Insulin Like Growth Factor 2 mRNA Binding Protein 3 (IGF2BP3)

NA重组甲型流感 H1N1 神经酶 (Neuraminidase / NA) (高活性) Protein

CD86 Protein Human 重组人 CD86 / B7-2 蛋白

Shiga toxin II subunit B Protein E. coli 重组肠出血性大肠杆菌 (EHEC) stx2B / Shiga toxin II subunit B 蛋白

胰岛素样生长因子2-mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)重组蛋白 Recombinant Insulin Like Growth Factor 2 mRNA Binding Protein 3 (IGF2BP3)

CD86 Protein Human 重组人 CD86 / B7-2 蛋白

CD38重组人 SCARB3 蛋白 Protein

Shiga toxin II subunit B Protein E. coli 重组肠出血性大肠杆菌 (EHEC) stx2B / Shiga toxin II subunit B 蛋白

NA重组甲型流感 H1N1 神经酶 (Neuraminidase / NA) (高活性) Protein

小鼠心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat testoterone ELISA Kit (T) 大鼠睾酮(T)检测试剂盒

Humanamiodarone,ADELISAKit 人呋酮(AD)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

ChickenC-ReactiveProtein,CRP检测试剂盒鸡C反应蛋白(CRP)检测试剂盒规格
：96T/48T

载玻片细胞CASPASE-2蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次

MousehepatitisBvirussurfaceaibody,HBsAbELISAKit小鼠乙型肝表面抗体(HBsAb)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠胰腺导管上皮细胞小鼠血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠血管内皮细胞生长因子受体-3(VEGFR-3)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR-2)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠血管内皮细胞生长因子受体1(VEGFR-1)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装