實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

大鼠胰腺導管上皮分離自胰腺組織 ；胰腺分為外分泌腺和內分泌腺兩部分 。外分泌腺由腺泡和腺管組成 ，腺泡分泌胰液 ，腺管是胰液排出的通道 。胰液中含有 、原 、脂肪酶 、等 。胰液通過胰腺管排入十二指腸 ，有消化蛋白質 、脂肪和糖的作用 。內分泌腺由大小不同的細胞團──胰島所組成 ，胰島主要由4種細胞組成 ：α細胞 、β細胞 、γ細胞及PP細胞 。α細胞分泌胰高血糖素 ，升高血糖 ；β細胞分泌胰島素 ，降低血糖 ；γ細胞分泌 ，以旁分泌的方式抑製α 、β細胞的分泌 ；PP細胞分泌胰多肽 ，抑製胃腸運動 、胰液分泌和膽囊收縮 。成體胰腺導管上皮細胞作為胰腺前體細胞 ，已證實具多向分化潛能 ，在合適的外源性刺激下可分化成胰島樣細胞 ，胰腺導管上皮細胞轉分化的胰島樣細胞免疫原性如何 ，轉分化的胰島樣細胞在治療糖尿病時是否發生免疫排斥反應 ，對幹細胞臨床治療糖尿病具有重要意義 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的大鼠胰腺導管上皮采用-膠原酶混合消化法結合密度梯度離心法 、差速貼壁法 ，並通過上皮細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠胰腺導管上皮經Cytokeratin-19免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠甘油-3-0酸脫氫酶(GAPDH)檢測試劑盒  ，英文名 ： GAPDH ELISA Kit

Pig superoxide dismase (SOD) ELISA Kit 豬超氧化物歧化酶(SOD)檢測試劑盒

流行性腮腺病毒(MV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforM-CSF(MouseMacrophageColony-StimulatingFactor)ELISAKit小鼠巨噬細胞集落刺激因子

體液氏菌(SalmonellaTyphi)定性試劑盒20次

ELISAKitMHC綿羊主要組織相容性複合體

CD38重組人 SCARB3 蛋白 Protein

胰島素樣生長因子2-mRNA結合蛋白3(IGF2BP3)重組蛋白 Recombinant Insulin Like Growth Factor 2 mRNA Binding Protein 3 (IGF2BP3)

NA重組甲型流感 H1N1 神經酶 (Neuraminidase / NA) (高活性) Protein

CD86 Protein Human 重組人 CD86 / B7-2 蛋白

Shiga toxin II subunit B Protein E. coli 重組腸出血性大腸杆菌 (EHEC) stx2B / Shiga toxin II subunit B 蛋白

胰島素樣生長因子2-mRNA結合蛋白3(IGF2BP3)重組蛋白 Recombinant Insulin Like Growth Factor 2 mRNA Binding Protein 3 (IGF2BP3)

CD86 Protein Human 重組人 CD86 / B7-2 蛋白

CD38重組人 SCARB3 蛋白 Protein

Shiga toxin II subunit B Protein E. coli 重組腸出血性大腸杆菌 (EHEC) stx2B / Shiga toxin II subunit B 蛋白

NA重組甲型流感 H1N1 神經酶 (Neuraminidase / NA) (高活性) Protein

小鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat testoterone ELISA Kit (T) 大鼠睾酮(T)檢測試劑盒

Humanamiodarone,ADELISAKit 人呋酮(AD)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

ChickenC-ReactiveProtein,CRP檢測試劑盒雞C反應蛋白(CRP)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

載玻片細胞CASPASE-2蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

MousehepatitisBvirussurfaceaibody,HBsAbELISAKit小鼠乙型肝表麵抗體(HBsAb)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

大鼠胰腺導管上皮細胞小鼠血管內皮細胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠血管內皮細胞生長因子受體-3(VEGFR-3)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠血管內皮細胞生長因子受體2(VEGFR-2)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠血管內皮細胞生長因子受體1(VEGFR-1)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝