老哥俱乐部

细胞简介
：

大鼠胰岛分离自胰腺组织；胰腺分为外分泌腺和内分泌腺两部分
。外分泌腺由腺泡和腺管组成
，腺泡分泌胰液，腺管是胰液排出的通道
。胰液中含有、原
、脂肪酶、等。胰液通过胰腺管排入十二指肠，有消化蛋白质
、脂肪和糖的作用。内分泌腺由大小不同的细胞团──胰岛所组成

，胰岛主要由4种细胞组成
：α细胞、β细胞、γ细胞及PP细胞
。α细胞分泌胰高血糖素，升高血糖
；β细胞分泌胰岛素，降低血糖；γ细胞分泌，以旁分泌的方式抑制α、β细胞的分泌
；PP细胞分泌胰多肽，抑制胃肠运动、胰液分泌和胆囊收缩。胰岛细胞作为糖尿病新药的细胞筛选模型需保持其结构完整
、生理功能稳定和足够长的存活时间。胰岛占胰腺总质量的1%-2%，每个胰岛大概含有1000个细胞
。胰岛移植可消除常规治疗产生的严重低血糖症状，具有创伤小及并发症少等优点
，是有前景的Ⅰ型糖尿病治疗方案。移植胰岛的获得需经过供体筛选、胰腺消化、胰岛分离纯化及结果鉴定等步骤，分离纯化效果取决于原料及操作方法的选择

。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠胰岛采用胶原酶灌注消化法结合密度梯度离心法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠胰岛经DTZ染色检测，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV
、支原体、细菌
、酵母和真菌等
。

培养信息
：

培养基 含FBS
、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形
、多角形

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养

：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化

；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清

，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min

，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4

、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1

：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品
：

小鼠可溶性瘦素受体试剂盒   小鼠可溶性瘦素受体试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠可溶性瘦素受体试剂盒，规格型号

：96T/48T，来源
：试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠可溶性瘦素受体试剂盒、小鼠可溶性瘦素受体试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期
：6个月。

小鼠可溶性核因子κB受体活化因子配基试剂盒   小鼠可溶性核因子κB受体活化因子配基试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠可溶性核因子κB受体活化因子配基试剂盒，规格型号：96T/48T
，来源
：试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠可溶性核因子κB受体活化因子配基试剂盒、小鼠可溶性核因子κB受体活化因子配基试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期
：6个月。

小鼠颗粒酶试剂盒   小鼠颗粒酶试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠颗粒酶试剂盒
，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装）
，产品别名
：小鼠颗粒酶试剂盒、小鼠颗粒酶试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期
：6个月。

小鼠抗内膜抗体试剂盒   小鼠抗内膜抗体试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠抗内膜抗体试剂盒，规格型号
：96T/48T
，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠抗内膜抗体试剂盒

、小鼠抗内膜抗体试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月
。

小鼠Ⅹ(FⅩ)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat alpha fetoprotein / alpha fetoprotein (AFP) ELISA Kit 大鼠甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)试剂盒

Humanimmunosuppressiveacidicprotein,IAPELISAKit 人免疫抑制酸性蛋白(IAP)试剂盒 96T/48T 进口分装

Human16-αHydroxyesogen1,16-αOHE-1试剂盒人16α羟基雌同1(16-αOHE-1)试剂盒规格
：96T/48T

真菌/酵母细胞线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒20次

MouseAquaporin2,AQP-2ELISAKit小鼠水通道蛋白2(AQP-2)试剂盒规格
：96T/48T

FLRT2重组小鼠 FLRT2 蛋白 Protein

含Ⅲ型纤连蛋白域蛋白5(FNDC5)重组蛋白 Recombinant Fibronectin Type III Domain Containing Protein 5 (FNDC5)

CCL23重组人 CCL23 / MIP 3 蛋白 Protein

CSK Protein Human 重组人 CSK / C-Src kinase 蛋白 (GST 标签)

ANGPTL1 Protein Canine 重组狗 ANGPTL1 / Angiopoietin-like 1 蛋白 (Fc 标签)

含Ⅲ型纤连蛋白域蛋白5(FNDC5)重组蛋白 Recombinant Fibronectin Type III Domain Containing Protein 5 (FNDC5)

CSK Protein Human 重组人 CSK / C-Src kinase 蛋白 (GST 标签)

FLRT2重组小鼠 FLRT2 蛋白 Protein

ANGPTL1 Protein Canine 重组狗 ANGPTL1 / Angiopoietin-like 1 蛋白 (Fc 标签)

CCL23重组人 CCL23 / MIP 3 蛋白 Protein

大鼠胰岛细胞大鼠肿瘤坏死因子β(TNFβ)试剂盒 ，英文名
： TNFβ ELISA Kit

Mouse soluble E selectin (sE-selectin) ELISA Kit 小鼠可溶性E选择素(sE-selectin)试剂盒

MouseEotaxin1ELISAKit 小鼠嗜酸粒细胞趋化蛋白Eotaxin1(Eotaxin1/CCL11)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforhumanImmunoglobulinE,IgEELISAKitE

微型RNA(miRNA)文库构建技术试剂盒5次

ELISAKitM-CSF大鼠巨噬细胞集落刺激因子

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min

，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。