老哥俱乐部

细胞简介：

大鼠眼动脉内皮分离自眼动脉组织，眼动脉是眼眶及内容物主要的血液供应，是颈内动脉主要分枝
，也是交通颅内外血管的重要通道。有研究结果认为，绝大多数眼动脉起源于ICA刚出海绵窦处，且多数起源于ICA床突上段内上壁，少数起源于上壁
，少数眼动脉可起源于ICA海绵窦段及脑膜中动脉
。眼动脉的走行分为颅内段、管内段及眶内段
，眼动脉在管内段一般行走于视神经上方，颅内段和眶内段再分为五段：1
、短臂；2、A角；3、长臂
；4、B角；5
、远侧部。眼动脉进入眶内后沿视神经向下外侧走行，终止于眶孔的上内侧角

。眼动脉的分枝一般分为眼组
、眶组及眶外组
。眼组分为视网膜中央动脉睫前动脉及眼球的脉络丛；眶组分为泪腺动脉和肌动脉
；眶外组分为筛后动脉、筛前动脉
、眶上动脉、睑内侧动脉、鼻背动脉(终末枝)。眼动脉内皮细胞是覆盖在眼动脉内面的单层细胞
，可分泌一系列血管活性物质而保持血管稳态，当其受到炎症或其它因素刺激后稳态被破坏而导致一些血管疾病的发生

。因此，眼动脉内皮细胞已成为研究眼部血管疾病发病机制及治疗药物的工具。内皮细胞或血管内皮是一薄层的专门上皮细胞，由一层扁平细胞所组成
。它形成血管的内壁
，是血管管腔内血液及其他血管壁（单层鳞状上皮）的接口。内皮细胞是沿着整个循环系统，由心脏直至小的微血管。眼动脉供应整个眼球
、眼球附属器及部分附近组织的营养。眼动脉可发生痉挛、血栓、栓塞及出血等
，均可严重影响视力。颈内动脉眼动脉瘤简称眼动脉瘤，又称床突旁动脉瘤或颈内动脉腹侧动脉瘤。眼动脉瘤是位于眼动脉和后交通动脉之间的动脉瘤，占全部颅内动脉瘤的0.47%～9.26%，30%～70%患者表现为SAH，1/3有视功能损伤
，如视力减退、视野缺损和视神经等

。体外培养的眼动脉内皮细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。

方法简介

：

实验室分离的大鼠眼动脉内皮采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来

，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶
。

质量检测

实验室分离的大鼠眼动脉内皮经CD31免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息
：

包被条件
：PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基
：基础培养基
，含FBS、EGF、bFGF、IGF、VEGF、Heparin、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等

换液频率

：每2-3天换液一次

生长特性
：贴壁

细胞形态：内皮细胞样

传代特性
：可传2-3代

消化液
：0.25%

培养条件：气相


：空气，95%

；CO2，5%

大鼠眼动脉内皮体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养
，以此保证该细胞的佳培养状态
。

实验报告
：

一
、分离与培养
：

1、无菌条件下

，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照

。

公司正在出售的产品：

大鼠儿茶酚抑素(CST)检测试剂盒 ，英文名： CST ELISA Kit

Pigskin quality ketone / coicosterone (CO) ELISA Kit 猪皮质酮/肾上腺酮(CO)检测试剂盒

鱼特定基因序列(Fish)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CLIAKitforLZM(MouseLysozyme)ELISAKit小鼠

体液总胆汁酸酶偶联反应比色法定量检测试剂盒20次

ELISAKitIGF-1鸡胰岛素样生长因子1

HA重组甲型流感 H6N8 (A/mallard/Ohio/217/1998) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

PAP2c (Phosphatidic acid phosphatase 2c 0.5mgPAP2c (Phosphatidic acid phosphatase 2c) 0脂酸0酸酶2C(抗原)

METTL1重组人 METTL1 蛋白 Protein

CD81 Protein Human 重组人 CD81 / TAPA-1 蛋白

APP Protein Human 重组人 APP / Protease nexin-II 蛋白 (Fc 标签)

PAP2c (Phosphatidic acid phosphatase 2c 0.5mgPAP2c (Phosphatidic acid phosphatase 2c) 0脂酸0酸酶2C(抗原)

CD81 Protein Human 重组人 CD81 / TAPA-1 蛋白

HA重组甲型流感 H6N8 (A/mallard/Ohio/217/1998) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

APP Protein Human 重组人 APP / Protease nexin-II 蛋白 (Fc 标签)

METTL1重组人 METTL1 蛋白 Protein

小鼠新生甲状腺素(NN-T4)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat ulasensitive thyroid stimulating hormone (U-TSH) ELISA Kit 大鼠高灵敏度促甲状腺激素(U-TSH)检测试剂盒

HumanAspaateaminoansferase,ASTELISAKit 人天门冬氨基转移酶(AST)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

ChickenAi-ThrombinⅢ,AT-Ⅲ检测试剂盒鸡抗Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)检测试剂盒规格
：96T/48T

载玻片细胞BAD蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次

MouseHistamine,HISELISAKit小鼠组胺(HIS)检测试剂盒规格

：96T/48T

大鼠眼动脉内皮细胞小鼠血红素氧合酶2(HO-2)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠血红素氧合酶1(HO-1)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(vWF)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠血管舒缓(BK)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题

，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h

。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞

，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意

： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。