細胞簡介 ：

大鼠眼動脈內皮分離自眼動脈組織 ，眼動脈是眼眶及內容物主要的血液供應 ，是頸內動脈主要分枝 ，也是交通顱內外血管的重要通道 。有研究結果認為 ，絕大多數眼動脈起源於ICA剛出海綿竇處 ，且多數起源於ICA床突上段內上壁 ，少數起源於上壁 ，少數眼動脈可起源於ICA海綿竇段及腦膜中動脈 。眼動脈的走行分為顱內段 、管內段及眶內段 ，眼動脈在管內段一般行走於視神經上方 ，顱內段和眶內段再分為五段 ：1 、短臂 ；2 、A角 ；3 、長臂 ；4 、B角 ；5 、遠側部 。眼動脈進入眶內後沿視神經向下外側走行 ，終止於眶孔的上內側角 。眼動脈的分枝一般分為眼組 、眶組及眶外組 。眼組分為視網膜中央動脈睫前動脈及眼球的脈絡叢 ；眶組分為淚腺動脈和肌動脈 ；眶外組分為篩後動脈 、篩前動脈 、眶上動脈 、瞼內側動脈 、鼻背動脈(終末枝) 。眼動脈內皮細胞是覆蓋在眼動脈內麵的單層細胞 ，可分泌一係列血管活性物質而保持血管穩態 ，當其受到炎症或其它因素刺激後穩態被破壞而導致一些血管疾病的發生 。因此 ，眼動脈內皮細胞已成為研究眼部血管疾病發病機製及治療藥物的工具 。內皮細胞或血管內皮是一薄層的專門上皮細胞 ，由一層扁平細胞所組成 。它形成血管的內壁 ，是血管管腔內血液及其他血管壁（單層鱗狀上皮）的接口 。內皮細胞是沿著整個循環係統 ，由心髒直至小的微血管 。眼動脈供應整個眼球 、眼球附屬器及部分附近組織的營養 。眼動脈可發生痙攣 、血栓 、栓塞及出血等 ，均可嚴重影響視力 。頸內動脈眼動脈瘤簡稱眼動脈瘤，又稱床突旁動脈瘤或頸內動脈腹側動脈瘤 。眼動脈瘤是位於眼動脈和後交通動脈之間的動脈瘤 ，占全部顱內動脈瘤的0.47%～9.26% ，30%～70%患者表現為SAH ，1/3有視功能損傷 ，如視力減退 、視野缺損和視神經等 。體外培養的眼動脈內皮細胞對於研究其生理功能 、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義 。

方法簡介 ：

實驗室分離的大鼠眼動脈內皮采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法 、並通過內皮細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的大鼠眼動脈內皮經CD31免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 ：PLL（0.1mg/ml） ，明膠（0.1%）

培養基 ：基礎培養基 ，含FBS 、EGF 、bFGF 、IGF 、VEGF 、Heparin 、Hydrocortisone 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：內皮細胞樣

傳代特性 ：可傳2-3代

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

大鼠眼動脈內皮體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠兒茶酚抑素(CST)檢測試劑盒  ，英文名 ： CST ELISA Kit

Pigskin quality ketone / coicosterone (CO) ELISA Kit 豬皮質酮/腎上腺酮(CO)檢測試劑盒

魚特定基因序列(Fish)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforLZM(MouseLysozyme)ELISAKit小鼠

體液總膽汁酸酶偶聯反應比色法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitIGF-1雞胰島素樣生長因子1

HA重組甲型流感 H6N8 (A/mallard/Ohio/217/1998) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

PAP2c (Phosphatidic acid phosphatase 2c 0.5mgPAP2c (Phosphatidic acid phosphatase 2c) 0脂酸0酸酶2C(抗原)

METTL1重組人 METTL1 蛋白 Protein

CD81 Protein Human 重組人 CD81 / TAPA-1 蛋白

APP Protein Human 重組人 APP / Protease nexin-II 蛋白 (Fc 標簽)

PAP2c (Phosphatidic acid phosphatase 2c 0.5mgPAP2c (Phosphatidic acid phosphatase 2c) 0脂酸0酸酶2C(抗原)

CD81 Protein Human 重組人 CD81 / TAPA-1 蛋白

HA重組甲型流感 H6N8 (A/mallard/Ohio/217/1998) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

APP Protein Human 重組人 APP / Protease nexin-II 蛋白 (Fc 標簽)

METTL1重組人 METTL1 蛋白 Protein

小鼠新生甲狀腺素(NN-T4)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat ulasensitive thyroid stimulating hormone (U-TSH) ELISA Kit 大鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)檢測試劑盒

HumanAspaateaminoansferase,ASTELISAKit 人天門冬氨基轉移酶(AST)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

ChickenAi-ThrombinⅢ,AT-Ⅲ檢測試劑盒雞抗Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

載玻片細胞BAD蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

MouseHistamine,HISELISAKit小鼠組胺(HIS)檢測試劑盒規格：96T/48T

大鼠眼動脈內皮細胞小鼠血紅素氧合酶2(HO-2)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠血紅素氧合酶1(HO-1)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠血管性血友病因子/瑞斯托黴素輔因子(vWF)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠血管舒緩(BK)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。