老哥俱乐部

细胞简介：

大鼠心肌分离自心脏组织

；心脏是脊椎动物身体中重要的一个器官，主要功能是为血液流动提供压力
，把血液运行至身体各个部分。心脏由心肌构成，左心房、左心室

、右心房、右心室四个腔组成。左右心房之间和左右心室之间均由间隔隔开，故互不相通

，心房与心室之间有瓣膜（房室瓣），这些瓣膜使血液只能由心房流入心室，而不能倒流
。心脏的作用是推动血液流动
，向器官、组织提供充足的血流量
，以供应氧和各种营养物质，并带走代谢的终产物（如二氧化碳
、无机盐

、尿素和尿酸等），使细胞维持正常的代谢和功能
。心肌细胞呈菱形、多边形等不规则形状；细胞培养2h后开始贴壁
，呈梭形；到12h左右，细胞开始伸出伪足
，呈菱形、多角形；分离培养48h以后，大部分伸出伪足、呈巴掌状，部分心肌细胞会出现搏动；心肌细胞为终末分化细胞，在体外不增殖。体外培养的心肌细胞可保持结构及功能上的某些特点，并具有自发性节律搏动
，且心肌细胞的培养具有简便
、定量、重复性好以及不受神经体液因素的影响等特点。利用培养的心肌细胞在探索非血液动力学因素所致的心肌肥厚的调节
，研究心肌细胞的生物力学、凋亡、受体下调
、缺血预处理
、信号通路、对作用于心脏的新药进行筛选并对其安全性进行评价以及从培养的心肌细胞中提取有价值的生物因子等方面具有广阔的应用前景，对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。

方法简介
：

公司实验室分离的大鼠心肌采用胶原酶-联合消化法结合差速贴壁法，并用化学试剂抑制法筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠心肌经α-Sarcometric actin免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml）

培养基 含FBS

、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形
、多角形

传代特性 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%
；CO2
，5%

实验报告
：

一
、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定

：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次

，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6

、用PBS冲洗3次
，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照

。

公司正在出售的产品
：

兔血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔(NO)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔补体蛋白3(C3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔p物质(SP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠αL岩藻糖苷酶(AFU)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat aquaporin 4 (AQP-4) ELISA Kit 大鼠水通道蛋白4(AQP-4)试剂盒

Humanplacealprotein,PPELISAKit 人胎盘蛋白(PP)试剂盒 96T/48T 进口分装

HumancicaicialPemphigoid,CP试剂盒人瘢痕性天疱疮抗体(CP)试剂盒规格
：96T/48T

组(leucine)含量比色法定量试剂盒20次

humanS100calciumbindingproteinA9/calgranulinB,S100A9ELISAKit人S100钙结合蛋白A9/钙粒蛋白B(S100A9)试剂盒规格：96T/48T

SERPIND1重组小鼠 SerpinD1 / HCII 蛋白 Protein

CD105/Endoglin/TGF- Beta receptor CD105/转化生长因子β受体抗原 0.5mgCD105/Endoglin/TGF- Beta receptor CD105/转化生长因子β受体抗原

SRC重组人 SRC Kinase / Proto-oncogene c-Src 蛋白 (His & GST 标签) Protein

HAGH Protein Human 重组人 HAGH / GLO2 / Glyoxalase II 蛋白

IL7 Protein Rat 重组大鼠 IL7 / interleukin 7 蛋白

CD105/Endoglin/TGF- Beta receptor CD105/转化生长因子β受体抗原 0.5mgCD105/Endoglin/TGF- Beta receptor CD105/转化生长因子β受体抗原

HAGH Protein Human 重组人 HAGH / GLO2 / Glyoxalase II 蛋白

SERPIND1重组小鼠 SerpinD1 / HCII 蛋白 Protein

IL7 Protein Rat 重组大鼠 IL7 / interleukin 7 蛋白

SRC重组人 SRC Kinase / Proto-oncogene c-Src 蛋白 (His & GST 标签) Protein

大鼠心肌细胞大鼠组胺H3受体(HRH3)试剂盒 ，英文名： HRH3 ELISA Kit

Mouse ai sperm aibody (AsAb) ELISA Kit 小鼠抗抗体(AsAb)试剂盒

Mouse8-Hydroxy-desoxyguanosine,8-OHdGELISAKit 小鼠8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanlymphocytefactorELISAKit人淋巴细胞因子

土壤(lithium)化学比色法定量试剂盒50次

ELISAKitdsDNA大鼠抗双链DNA抗体/天然DNA抗体

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象

，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。