實驗報告 ：

一、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

大鼠小氣道平滑肌分離自小氣道組織 ；臨床上通常將內徑小於2mm的小細支氣管稱為小氣道 。小氣道具有氣流阻力小 ，但易阻塞的特點 。在平靜吸氣時 ，空氣進入狹窄的鼻咽部 ，產生渦流 。由於小氣道已無軟骨支持 ，在脫離纖維鞘嵌入肺組織後 ，管腔通暢性不象軟骨性氣道 ，易於受胸腔的壓力變化的影響 。小氣道上皮細胞形成連續呼吸道內層 ，作為隔絕外界有害物質的物理和功能屏障發揮著的作用 。小氣道位於肺泡和氣管的交界處 ，這些細胞在功能上能夠調節免疫反應 、產生化學因子進行宿主防禦 、表達粘附分子 ，並可能通過HLA-DR表達呈遞抗原 ；它們還能產生液體有助於肺液的平衡 。許多呼吸道疾病 ，如哮喘 、支氣管炎 、慢性阻塞性肺病和囊性纖維化 ，都涉及呼吸道表麵上皮細胞的破壞 ；小氣道上皮細胞的培養可為防止呼吸道擴增疾病和重塑提供新的治療選擇 。小氣道平滑肌細胞原代分離培養3天後 ，可見細胞貼壁伸展，細胞形態大小不一 ，呈梭形 、不規則形、三角形或扇形 ，核卵圓形 、居中 ；2周後細胞匯合 ，多數細胞伸展呈長梭形 ，胞漿豐富 ，有分枝狀突起 ，細胞平行排列成單層或部分區域多層重疊生長 ，高低起伏 ；細胞密度低時 ，常交織成網狀 ；密度高時 ，則排列為旋渦狀或柵欄狀 。傳代後細胞生長較快 ，4-6天即可匯合 ，並保持上述形態學特征和生長特點 。小氣道的生理功能特點 ：①小氣道阻力小 ；②氣流速度慢 ；③可調節控製通氣與血流比例 。小氣管平滑肌細胞主要功能 ：①保持氣道張力維持小氣道形態 ；②肺小氣道進行氣體交換 ，病變可引起換氣功能障礙 ；③炎症 、痰液阻塞或當氣道外壓大於氣道內壓時容易造成小氣道閉合 、萎陷 。小氣管平滑肌細胞與主要病生理變化 ：①支氣管炎 ；②肺氣腫 ；③慢性阻塞性肺疾病 。

方法簡介 ：

實驗室分離的大鼠小氣道平滑肌采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的大鼠小氣道平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 ：基礎培養基 ，含FBS 、EGF 、bFGF 、Insulin 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：成纖維細胞樣

傳代特性 ：可傳3代左右

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

大鼠小氣道平滑肌體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ，，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠降解產物(FDP)檢測試劑盒  ，英文名 ： FDP ELISA Kit

Pla zeatin riboside (ZR) ELISA Kit 植物玉米素核苷(ZR)檢測試劑盒

Mousemacrophageinflammatoryprotein5,MIP-5ELISAKit 小鼠巨噬細胞性蛋白5(MIP-5)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanadvancedglycationendproducts,AGEsELISAKit人晚期糖基化終末產物

細胞HPV6(HUMANPAPILLOMAVIRUS-6)病毒定量PCR擴增檢測試劑盒20次

ELISAKitC3a大鼠補體片斷3a

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PACAP-38 腺苷酸環化酶激活肽-38(抗原 0.5mgPACAP-38 腺苷酸環化酶激活肽-38(抗原)

MANF重組人 MANF / ARMET 蛋白 Protein

CD47 Protein Human 重組人 CD47 蛋白 (Fc 標簽)

ACVR1 Protein Human 重組人 ALK-2 / ACVR1 蛋白 (His & Fc 標簽)

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小鼠血管內皮細胞生長因子B(VEGF-B)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat calmodulin (CAM) ELISA Kit 大鼠鈣調素(CAM)檢測試劑盒

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C3檢測試劑盒鮭魚補體蛋白3規格 ：96T/48T

魚類受精卵細胞凍存試劑盒(低溫)50次

MouseInsulin,INSELISAKit小鼠胰島素(INS)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

大鼠小氣道平滑肌細胞小鼠牙本質涎0蛋白   英文名稱 ：   Mouse Dein Sialophosphoprotein   規格 ：      英文縮寫 ：   DSP

小鼠DNA抗體   英文名稱 ：   Mouse Deoxyribonucleic Acid Aibody   規格 ：      英文縮寫 ：   DNA.Ab

小鼠氧化酶   英文名稱 ：   Mouse Diamine Oxidase   規格 ：      英文縮寫 ：   DAO

小鼠多巴胺受體D1   英文名稱 ：   Mouse Dopamine receptor D1   規格 ：      英文縮寫 ：   DRD1