老哥俱乐部

细胞简介

：

大鼠胃黏膜上皮分离自胃黏膜组织
；胃黏膜柔软，活体呈橘红色

。胃空虚时形成许多皱襞

，充盈时变平坦。幽门处的黏膜形成环形皱襞
，突向腔内称幽门瓣
。胃黏膜可分为三层，即上皮层（单层柱状上皮）、固有层（由结缔组织构成、含有大量的胃腺）和黏膜肌层（为薄层平滑肌
、排列成内环外纵）
。胃黏膜上皮细胞源自胃黏膜的上皮层，细胞为单层柱状上皮，排列整齐，能分泌黏液覆盖于胃黏膜的表面，防止胃酸和对胃黏膜的损害。体外培养胃黏膜上皮细胞为研究细胞功能及致病因子
、药物
、激素对细胞的损伤
、保护和功能调控提供了简单而的模型。

方法简介
：

公司实验室分离的大鼠胃黏膜上皮采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠胃黏膜上皮经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体、细菌

、酵母和真菌等。

培养信息
：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%；CO2，5%

实验报告：

一

、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置

，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品
：

人孕激素/孕(PROG)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人超敏游离雌三醇(uE3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人去甲上腺素(NA)ELISAKIT   ELISA.   96T/48T

人前列腺素F(PGF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

豚鼠白介素10(IL10)试剂盒 ，英文名： IL10 ELISA Kit

Human mannose receptor (MR) ELISA Kit 人甘露糖受体(MR)试剂盒

RabbitGlucosedependeinsulieleasingpolypeptide,GIPELISAKit 兔子葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforATGA/TGABELISAKit大鼠抗甲状腺球蛋白抗体

线粒体复合物IV蛋白免疫共沉淀分析试剂盒5次

Rabbitamyloidbetapeptide1-40,Aβ1-40ELISAKit兔β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)试剂盒规格：96T/48T

FCGRT & B2M重组食蟹猴 FCGRT & B2M Heterodimer 蛋白 Protein

MMP-13 (Matrix metalloproteinase 13 0.5mgMMP-13 (Matrix metalloproteinase 13) 基质金属蛋白酶13抗原

CLIC4重组人 CLIC4 蛋白 Protein

JAM3 Protein Human 重组人 JAM3 / JAM-C 蛋白

SEMA5A Protein Mouse 重组小鼠 Semaphorin 5A / SEMA5A 蛋白

MMP-13 (Matrix metalloproteinase 13 0.5mgMMP-13 (Matrix metalloproteinase 13) 基质金属蛋白酶13抗原

JAM3 Protein Human 重组人 JAM3 / JAM-C 蛋白

FCGRT & B2M重组食蟹猴 FCGRT & B2M Heterodimer 蛋白 Protein

SEMA5A Protein Mouse 重组小鼠 Semaphorin 5A / SEMA5A 蛋白

CLIC4重组人 CLIC4 蛋白 Protein

大鼠胃黏膜上皮细胞人乙型肝病毒核心抗原(HBcAg) 试剂盒

Human tissue polypeptide aigen (TPA) ELISA Kit 人组织多肽抗原(TPA)试剂盒

HumanangiotensionIreceptorAibody,ANG-ⅠRaibodyELISAKit 人血管紧张素Ⅰ受体抗体(ANG-ⅠR)试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanIerleukin3,IL-3试剂盒人白介素3(IL-3)试剂盒规格：96T/48T

组织(lithium)酶连续循环反应比色法定量试剂盒20次

humanIerleukin27
，IL-27ELISAKit人白介素27(IL-27)试剂盒规格
：96T/48T

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液

、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系

。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题

，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。