實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

大鼠胎盤羊膜分離自胎盤組織 ；胎盤（placenta）是哺乳動物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內膜聯合長成的母子間交換物質的過渡性器官 ，由羊膜 、葉狀絨毛膜和底蛻膜構成 。胎兒在子宮中發育 ，依靠胎盤從母體取得營養 ，而雙方保持相當的獨立性 。胎盤還產生多種維持妊娠的激素 ，是一個重要的內分泌器官 。有些爬行類和魚類也以胎生方式繁殖後代 ，胚胎生長出一些輔助結構如卵黃囊 、鰓絲等與母體組織緊密結合 ，以達到母子間物質的交換 ，這樣的結構稱假胎盤 。羊膜是胎盤的內層 ，與眼結膜組織結構相似 ，含有眼表上皮細胞 ，包括結膜細胞和角膜上皮細胞生長所需要的物質 ，其光滑 ，無血管 、神經及淋巴 ，具有一定的彈性 ；在電鏡下 ，其分為五層 ：上皮層 、基底膜 、致密層 、纖維母細胞層和海綿層 ，羊膜基底膜和羊膜羊膜基質層含有大量不同的膠元 ，主要為Ⅰ 、Ⅲ 、Ⅳ 、Ⅴ 、Ⅶ型膠原和纖維粘連蛋白 、層粘連蛋白等成份 。羊膜細胞主要由羊膜上皮細胞和羊膜間充質細胞組成 ，均具有多分化潛能 ，可轉化為神經元 ，且還有合成 、釋放生物活性物質和神經營養因子的功能 。

方法簡介 ：

實驗室分離的大鼠胎盤羊膜采用-膠原酶聯合消化法製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶。

質量檢測

實驗室分離的大鼠胎盤羊膜經PCK免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 ：PLL（0.1mg/ml）

培養基 ：含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態：梭形 、多角形

傳代特性 ：可傳1-2代

消化液 ：0.25%

培養條件：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

大鼠胎盤羊膜體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品：

大鼠鈣腔蛋白(CALU)檢測試劑盒  ，英文名 ： CALU ELISA Kit

Porcine dexamethasone (Dex) ELISA Kit 豬(Dex)檢測試劑盒

轉基因植物Bar基因核酸檢測試劑盒 48T

CLIAKitforMCP-1/CCL2/MCAFELISAKIT大鼠單核細胞趨化蛋白1

體液血管緊張素Ⅰ轉化酶1(ACE1)活性比色法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitMHC/ELA馬主要組織相容性複合體

PDGFC重組食蟹猴 PDGF-C / PDGFC 蛋白 (Fc 標簽) Protein

HSP-90 Beta (heat sock protein-90 Beta 0.5mgHSP-90 Beta (heat sock protein-90 Beta) 熱休克蛋白-90β (抗原)

CA4重組人 Carbonic Anhydrase IV / CA4 蛋白 Protein

CD3D Protein Human 重組人 CD3d / CD3 delta 蛋白 (Fc & FLAG 標簽)

SEMA3A Protein Mouse 重組小鼠 Semaphorin 3A / SEMA3A 蛋白 (Fc 標簽)

HSP-90 Beta (heat sock protein-90 Beta 0.5mgHSP-90 Beta (heat sock protein-90 Beta) 熱休克蛋白-90β (抗原)

CD3D Protein Human 重組人 CD3d / CD3 delta 蛋白 (Fc & FLAG 標簽)

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小鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human leukocyte aigen A (HLA-A) ELISA Kit 人類白細胞抗原A(HLA-A)檢測試劑盒

HumanBeta-naphtholELISAKit 人β萘酚(β-naphthol)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitfor乙型肝二對半全套(立可讀)

熒光原位雜交彗星檢測試劑盒20次

MouseIerleukin13,IL-13ELISAKit小鼠白介素13(IL-13)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

大鼠胎盤羊膜細胞小鼠乙型肝表麵抗體(HBsAb)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠乙型肝e抗原(HBeAg)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠乙型肝e抗體(HBeAb)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠乙酰轉移酶（CHAT）檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝