老哥俱乐部

实验报告：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次

，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）

，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清

，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

大鼠脐动脉内皮分离自脐带组织
；它是脐动脉的重要结构组成细胞之一，在机体的正常生理过程中发挥着重要作用
。脐带是哺乳类的连接胎儿和胎盘的管状结构，脐带中通过尿膜的血管即脐动脉和脐静脉，卵黄囊的血管即脐肠系膜动脉及脐肠系膜静脉

。在子宫中
，子宫动脉在胎盘的母体部分出的毛细血管
，与胎盘的子体部胎儿毛细血管靠近，在此处母体和胎儿的血液间进行CO2和O2，代谢产物即代谢废物和营养物质的交换。脐动脉将胎儿产生的废物运送至胎盘，脐静脉将O2和营养物质从胎盘运送给胎儿。

方法简介：

实验室分离的大鼠脐动脉内皮采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来

，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶
。

质量检测

实验室分离的大鼠脐动脉内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1
、HBV
、HCV、支原体
、细菌
、酵母和真菌等
。

培养信息：

包被条件


：PLL（0.1mg/ml）
，明胶（0.1%）

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态
：内皮细胞样

传代特性：可传2-3代

消化液
：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2
，5%

大鼠脐动脉内皮体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养
，以此保证该细胞的培养状态。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象

，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h

。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞

，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品
：

大鼠单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)检测试剂盒

，英文名： MCP-4/CCL13 ELISA Kit

Porcine insulin-like growth factor 2 (IGF-2) ELISA Kit 猪胰岛素样生长因子2(IGF-2)检测试剂盒

ELISA 小鼠抗核抗体(mouse ANA)  进口分装

CLIAKitforLp-AlphaELISAKit大鼠脂蛋白α

通用型CHIPDNA分子库构建试剂盒10次

ELISAKitIL-3鸡白介素3

IL13RA2重组人 IL13RA2 / IL13R 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

瘦素受体(LEPR)重组蛋白 Recombinant Leptin Receptor (LEPR)

LIF重组人 LIF 蛋白 Protein

CD1D Protein Human 重组人 CD1D / R3G1 蛋白

HA Protein H3N2 重组甲型流感 H3N2 (A/Wyoming/03/2003) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

瘦素受体(LEPR)重组蛋白 Recombinant Leptin Receptor (LEPR)

CD1D Protein Human 重组人 CD1D / R3G1 蛋白

IL13RA2重组人 IL13RA2 / IL13R 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

HA Protein H3N2 重组甲型流感 H3N2 (A/Wyoming/03/2003) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

LIF重组人 LIF 蛋白 Protein

小鼠原激活肽(TAP)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human soluble endothelial protein C receptor (sEPCR) ELISA Kit 人可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)检测试剂盒

HumanSolubleAdenylateCyclase,sACELISAKit 人可溶性腺苷酸环化酶(sAC)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitfor17-OHCS(Human17-Hydroxycoicosteroids)ELISAKit人17羟皮质类固醇

饮料精(arginine)含量高效液相色谱法定量检测试剂盒20次

MouseLeukoieneB4,LT-B4ELISAKit小鼠白三烯B4(LTB4)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠脐动脉内皮细胞小鼠组织蛋白去乙酰化酶(HD)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠雌三醇(E3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠雄烯二(ASD)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠游离睾(F-TESTO)ELISAKit   ELISA.   96T/48T