老哥俱乐部

细胞简介：

大鼠脐带间充质干分离自脐带；脐带是哺乳类的连接胎儿和胎盘的管状结构

。原来是由羊膜包卷着卵黄囊和尿膜的柄状伸长部而形成的
。脐带中通过尿膜的血管即脐动脉和脐静脉，卵黄囊的血管即脐肠系膜动脉及脐肠系膜静脉。当卵黄囊及其血管退化，脐动脉和脐静脉就发达起来，在这些间隙中可以看到疏松的胶状的间充质。在子宫中，子宫动脉在胎盘的母体部分出的毛细血管，与胎盘的子体部胎儿毛细血管靠近，在此处母体和胎儿的血液间进行CO2和O2
，代谢产物即代谢废物和营养物质的交换
。脐动脉将胎儿来的废物运送至胎盘，脐静脉将O2和营养物质从胎盘运送给胎儿
。后由子宫静脉将来自胎儿的代谢废物运走，某种激素和抗体等也通过脐带从母体移交给胎儿。脐带中含有大量的干细胞
，干细胞是生命的种子
，它会分化成机体的各种细胞
，结出各种不同的果实——血液细胞
、神经细胞
、骨骼细胞等。干细胞是具有自我更新、高度增殖和多项分化潜能的细胞群体；这些细胞可以通过分裂维持自身细胞的特性和数量，又可进一步分化为各种组织细胞
，从而在组织修复等方面发挥积极作用。间充质干细胞（MSC）是一种具有高度自我更新和多向分化潜能的干细胞。在不同的诱导条件下，可分化为多种造血细胞以外的组织细胞，并具有造血支持、免疫调节
、组织修复等作用
；目前，多用于风湿免疫疾病的治疗
。间充质干细胞（MSCs）是一种具有自我更新和多向分化潜能的成体干细胞
，存在于骨髓、脂肪组织
、脐血及多种胎儿组织
。它可分泌多种细胞因子及生长因子
，促进造血干细胞（HSC）的增殖与分化。MSCs还具有免疫调节
、抗炎和组织修复作用
，可减轻移植物抗宿主病（GVHD）及其他移植相关并发症

。

方法简介
：

公司实验室分离的大鼠脐带间充质干采用组织贴块法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠脐带间充质干经CD90免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV
、支原体、细菌
、酵母和真菌等
。

培养信息
：

培养基 含FBS

、生长添加剂

、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右
；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气，95%；CO2
，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2

、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4

、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二

、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品

：

人状瘤病毒抗体IgG(HPV-IgG)试剂盒   96T/48T

人状瘤病毒抗体(HPV)试剂盒   96T/48T

人瘤病毒58（HPV-58）试剂盒   96T/48T

人瘤病毒18（HPV-18）试剂盒   96T/48T

豚鼠钩端IgG(Leptospira)试剂盒 
，英文名： Leptospira ELISA Kit

Human toxic shock syndrome toxin 1 iegrated (TSST-1) ELISA Kit 人毒性休克综合征毒素1(TSST-1)试剂盒

RabbitMacrophageInflammatoryProtein-1α,MIP-1αELISAkit 兔子巨噬细胞性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforbFGFELISAKit大鼠碱性成纤维生长因子

细菌色肉汤500毫升

RabbitIerleukin1,IL-1ELISAKit兔子白介素1(IL-1)试剂盒规格：96T/48T

ADAM15重组人 ADAM15 / MDC15 蛋白 Protein

嗅素4(OLFM4)重组蛋白 Recombinant Olfactomedin 4 (OLFM4)

HA重组甲型流感 H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

IL22RA2 Protein Human 重组人 IL22BP / IL22RA2 蛋白

Spike Protein MERS-CoV 中东呼吸综合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein fragment (aa 383-502, Fc 标签)

嗅素4(OLFM4)重组蛋白 Recombinant Olfactomedin 4 (OLFM4)

IL22RA2 Protein Human 重组人 IL22BP / IL22RA2 蛋白

ADAM15重组人 ADAM15 / MDC15 蛋白 Protein

Spike Protein MERS-CoV 中东呼吸综合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein fragment (aa 383-502, Fc 标签)

HA重组甲型流感 H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

大鼠脐带间充质干细胞兔子凋亡诱导因子(AIF)ELISA 试剂盒

Human vasoactive iestinal peptide (VIP) ELISA Kit 人血管活性肠肽(VIP)试剂盒

Humanai-teichoicacidaibody,TAELISAKit 人抗0壁酸抗体(TA)试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanepidermalkeratin,EK试剂盒人表皮角蛋白(EK)试剂盒规格：96T/48T

组织PRAK激酶活性定量试剂盒(A/B/C)20次

HumanPancreastatinELISAKit人胰抑制素(Pancreastatin)试剂盒规格
：96T/48T

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面

，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，

，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况


，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意

： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。