細胞簡介 ：

大鼠臍帶間充質幹分離自臍帶 ；臍帶是哺乳類的連接胎兒和胎盤的管狀結構 。原來是由羊膜包卷著卵黃囊和尿膜的柄狀伸長部而形成的。臍帶中通過尿膜的血管即臍動脈和臍靜脈 ，卵黃囊的血管即臍腸係膜動脈及臍腸係膜靜脈 。當卵黃囊及其血管退化 ，臍動脈和臍靜脈就發達起來 ，在這些間隙中可以看到疏鬆的膠狀的間充質 。在子宮中 ，子宮動脈在胎盤的母體部分出的毛細血管 ，與胎盤的子體部胎兒毛細血管靠近 ，在此處母體和胎兒的血液間進行CO2和O2 ，代謝產物即代謝廢物和營養物質的交換 。臍動脈將胎兒來的廢物運送至胎盤 ，臍靜脈將O2和營養物質從胎盤運送給胎兒 。後由子宮靜脈將來自胎兒的代謝廢物運走 ，某種激素和抗體等也通過臍帶從母體移交給胎兒 。臍帶中含有大量的幹細胞 ，幹細胞是生命的種子 ，它會分化成機體的各種細胞 ，結出各種不同的果實——血液細胞 、神經細胞 、骨骼細胞等 。幹細胞是具有自我更新 、高度增殖和多項分化潛能的細胞群體 ；這些細胞可以通過分裂維持自身細胞的特性和數量 ，又可進一步分化為各種組織細胞 ，從而在組織修複等方麵發揮積極作用 。間充質幹細胞（MSC）是一種具有高度自我更新和多向分化潛能的幹細胞 。在不同的誘導條件下 ，可分化為多種造血細胞以外的組織細胞 ，並具有造血支持 、免疫調節 、組織修複等作用 ；目前 ，多用於風濕免疫疾病的治療 。間充質幹細胞（MSCs）是一種具有自我更新和多向分化潛能的成體幹細胞 ，存在於骨髓 、脂肪組織 、臍血及多種胎兒組織 。它可分泌多種細胞因子及生長因子 ，促進造血幹細胞（HSC）的增殖與分化 。MSCs還具有免疫調節 、抗炎和組織修複作用 ，可減輕移植物抗宿主病（GVHD）及其他移植相關並發症 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的大鼠臍帶間充質幹采用組織貼塊法製備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠臍帶間充質幹經CD90免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右 ；3代以內狀態佳

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

人狀瘤病毒抗體IgG(HPV-IgG)試劑盒   96T/48T

人狀瘤病毒抗體(HPV)試劑盒   96T/48T

人瘤病毒58（HPV-58）試劑盒   96T/48T

人瘤病毒18（HPV-18）試劑盒   96T/48T

豚鼠鉤端IgG(Leptospira)試劑盒  ，英文名 ： Leptospira ELISA Kit

Human toxic shock syndrome toxin 1 iegrated (TSST-1) ELISA Kit 人毒性休克綜合征毒素1(TSST-1)試劑盒

RabbitMacrophageInflammatoryProtein-1α,MIP-1αELISAkit 兔子巨噬細胞性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforbFGFELISAKit大鼠堿性成纖維生長因子

細菌色肉湯500毫升

RabbitIerleukin1,IL-1ELISAKit兔子白介素1(IL-1)試劑盒規格 ：96T/48T

ADAM15重組人 ADAM15 / MDC15 蛋白 Protein

嗅素4(OLFM4)重組蛋白 Recombinant Olfactomedin 4 (OLFM4)

HA重組甲型流感 H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

IL22RA2 Protein Human 重組人 IL22BP / IL22RA2 蛋白

Spike Protein MERS-CoV 中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein fragment (aa 383-502, Fc 標簽)

嗅素4(OLFM4)重組蛋白 Recombinant Olfactomedin 4 (OLFM4)

IL22RA2 Protein Human 重組人 IL22BP / IL22RA2 蛋白

ADAM15重組人 ADAM15 / MDC15 蛋白 Protein

Spike Protein MERS-CoV 中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein fragment (aa 383-502, Fc 標簽)

HA重組甲型流感 H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

大鼠臍帶間充質幹細胞兔子凋亡誘導因子(AIF)ELISA 試劑盒

Human vasoactive iestinal peptide (VIP) ELISA Kit 人血管活性腸肽(VIP)試劑盒

Humanai-teichoicacidaibody,TAELISAKit 人抗0壁酸抗體(TA)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanepidermalkeratin,EK試劑盒人表皮角蛋白(EK)試劑盒規格 ：96T/48T

組織PRAK激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

HumanPancreastatinELISAKit人胰抑製素(Pancreastatin)試劑盒規格 ：96T/48T

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。