實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

大鼠胚胎肝母分離自胚胎肝組織 ；肝髒是身體內以代謝功能為主的一個器官 ，並在身體裏麵起著去氧化 、儲存肝糖 、分泌性蛋白質的合成等作用；肝髒也製造消化係統中之膽汁 。肝髒是機體內髒裏最大的器官 ，位於機體中的腹部位置 ，在右側橫隔膜之下 ，位於膽囊之前端且於右邊腎髒的前方 ，胃的上方 。肝髒是機體消化係統中最大的消化腺 ，為一紅棕色的V字形器官 。肝髒是尿素合成的主要器官 ，又是新陳代謝的重要器官 。肝髒起源於腹側前腸內胚層細胞（一種多潛能幹細胞）。在 ED8.5 的小鼠和 ED9.5 的大鼠 ，前腸的原始上皮細胞接觸心肌中胚層後快速增殖 ，形成肝原基 。大約1d後 ，原始上皮細胞侵入原始橫膈 ，繼續分化為幼稚肝髒上皮細胞 ，這些細胞先表達 AFP 然後是ALb 。幼稚肝髒上皮細胞很快成熟 ，並進一步分化為肝細胞或膽管上皮細胞 ，因為此期的肝髒上皮細胞其具有向這兩種肝實質細胞雙向分化的潛能，所以又稱肝母細胞 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的大鼠胚胎肝母采用膠原酶消化法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠胚胎肝母經PCK免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 上皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代左右

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠穀酰胺(Gln)檢測試劑盒  ，英文名 ： Gln ELISA Kit

Porcine ierferon alpha (IFN- alpha) ELISA Kit 豬α幹擾素(IFN-α)檢測試劑盒

出血性大腸杆菌(EHEC)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMIP-1Alpha/CCL3(HumanMacrophageInflammatoryProtein-1Alpha)ELISAkit人巨噬細胞性蛋白1α

體液科薩基病毒B(CoxsackievirusB)定性檢測試劑盒20次

ELISAKit2,3-DPG犬2,3-二0酸甘油酸

IFNGR2重組小鼠 IFNGR2 蛋白 Protein

ABCD-1/CCL22 嗜酸粒細胞趨化蛋白22抗原 0.2mgABCD-1/CCL22 嗜酸粒細胞趨化蛋白22抗原

BPIFA2重組人 BPIFA2 / C20orf70 蛋白 (Fc 標簽) Protein

CD19 Protein Human 重組人 CD19 / Leu-12 蛋白

TIMP1 Protein Rat 重組大鼠 TIMP-1 / TIMP1 蛋白

ABCD-1/CCL22 嗜酸粒細胞趨化蛋白22抗原 0.2mgABCD-1/CCL22 嗜酸粒細胞趨化蛋白22抗原

CD19 Protein Human 重組人 CD19 / Leu-12 蛋白

IFNGR2重組小鼠 IFNGR2 蛋白 Protein

TIMP1 Protein Rat 重組大鼠 TIMP-1 / TIMP1 蛋白

BPIFA2重組人 BPIFA2 / C20orf70 蛋白 (Fc 標簽) Protein

小鼠胰島素樣生長因子2(IGF-2)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat monocyte chemotactic protein 4 (MCP-4/CCL13) ELISA Kit 大鼠單核細胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)檢測試劑盒

HumanGasicMucin,GMELISAKit 人胃粘液素(GM)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitfor2,3-DPG(Human2,3-Disphosphoglycerate,2)ELISAKit人2,3-二0酸甘油酸

飲料環(cyclamate)含量薄層色譜法定性檢測試劑盒20次

Mouselipoproteinα,Lp-αELISAKit小鼠脂蛋白α(Lp-α)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

大鼠胚胎肝母細胞小鼠組織因子途徑抑製物(TFPI)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠水通道蛋白5(AQP-5)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠水通道蛋白4(AQP-4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠水通道蛋白3(AQP-3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T