細胞簡介 ：

大鼠胚胎成纖維分離自胚胎 ；成纖維細胞（Fibroblast）是疏鬆結締組織的主要細胞成分 ，由胚胎時期的間充質細胞分化而來 。成纖維細胞較大 ，輪廓清楚 ，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構 ，其細胞核呈規則的卵圓形 ，核仁大而明顯 。成纖維細胞功能活動旺盛 ，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動 ，在一定條件下 ，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化 ；成纖維細胞對不同程度的細胞變性 、壞死和組織缺損的修複有著十分重要的作用 。剛分離的胚胎成纖維細胞呈圓形 、折光性良好，懸浮於培養基中 。30min細胞貼壁 ，其中部分開始伸出偽足 ，表現為小的突起 ；6h後細胞基本貼壁 ，伸展成梭形 ，胞核清晰 ，分布較均勻 ，散在生長 ，不聚集成團 ；細胞生長迅速 ，5-7天即呈融合狀態 ，細胞排列緊密 ，有的交叉重疊生長 ，平坦 、胞體較大 ，細胞質透明 ，細胞核較大 ，呈橢圓形 ，顏色淡 。細胞融合 ，並彼此連接成網狀 ；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布 。細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。該細胞常用作ES細胞培養常用的飼養層細胞 ，能產生抑製ES細胞自主分化和促進ES細胞增殖的因子 ，故能有效地促進ES細胞的增殖並維持其未分化特性和多潛能性 ，且分泌效果優於外源添加的一些因子 ，而且可以為ES細胞的培養提供類似於體內的微環境 ，故在研究哺乳動物ES細胞中得到廣泛使用 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的大鼠胚胎成纖維采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠胚胎成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右 ；3代以內狀態佳

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

中文名稱   方法   規格

大鼠粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白(NGAL)ELISAKit   ELISA. 

大鼠幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISAKit   ELISA. 

大鼠雌激素受體(ER)ELISAKit   ELISA.

豬白介素1α(IL-1α)ELISA 試劑盒

Human ai Q thermal aibody (ai-Q-Ab) ELISA Kit 人抗Q熱抗體(ai-Q-Ab)試劑盒

PorcineIerleukin1,IL-1ELISAKit 豬白介素1(IL-1)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforAKA(HumanAi-keratinaibody)ELISAKit人抗角蛋白抗體

血液尿酸含量酶偶聯比色法定量試劑盒20次

MouseUlasensitivityi-iodothyronine,u-T3ELISAKit小鼠高敏三甲狀腺原(u-T3)試劑盒

CD24重組小鼠 CD24 / Ly-52 / CD24A 蛋白  Protein

凋亡相關因子配體(FASL)重組蛋白 Recombinant Factor Related Apoptosis Ligand (FASL)

NAPG重組人 NAPG / Gamma SNAP 蛋白 (His 標簽) Protein

AK4 Protein Human 重組人 AK4 / Adenylate Kinase 4 / AK3L1 蛋白 (His & GST 標簽)

IGFBP3 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IGFBP3 蛋白 (His 標簽)

凋亡相關因子配體(FASL)重組蛋白 Recombinant Factor Related Apoptosis Ligand (FASL)

AK4 Protein Human 重組人 AK4 / Adenylate Kinase 4 / AK3L1 蛋白 (His & GST 標簽)

CD24重組小鼠 CD24 / Ly-52 / CD24A 蛋白  Protein

IGFBP3 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IGFBP3 蛋白 (His 標簽)

NAPG重組人 NAPG / Gamma SNAP 蛋白 (His 標簽) Protein

大鼠胚胎成纖維細胞兔子血纖蛋白原降解產物(FDP)ELISA 試劑盒

Rat angiopoietin receptor Tie2 (ANG-R-Tie2) ELISA Kit 大鼠血管生成素受體Tie2(ANG-R-Tie2)試劑盒

Humanai-ribosomalPproteinaibody,ARPA/Rib-PELISAKit 人抗核糖體P蛋白抗體(ARPA/Rib-P)試劑盒 進口分裝

HumanD-Dimer,D2D試劑盒人D二聚體(D2D)試劑盒

組織IRAK1激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

Humanplasmin-aiplasmincomplex,PAPELISAKit人纖溶酶抗纖溶酶複合物(PAP)試劑盒

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。