老哥俱乐部

细胞简介：

大鼠尿道上皮分离自尿道管组织；尿道是从膀胱通向体外的管道
。尿道上皮细胞主要功能
：①尿道上皮细胞排列在膀胱表面
，它是由高可塑性和具有多种功能特殊类型的细胞组成
；②上皮细胞组成膀胱的防御系统与病原体接触，它们具有多种防御机制来阻止病原体粘着
，保持泌尿器溶解物的不渗透性
；③膀胱上皮细胞表达雌激素α
、β受体
，上皮生长因子受体和纤维母细胞生长因子受体，在损伤和感染时
，这些受体对膀胱上皮细胞起着重要作用；④能释放许多细胞因子
、免疫系统介质
。

方法简介
：

公司实验室分离的大鼠尿道上皮采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法

，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠尿道上皮经PCK免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS
、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气，95%
；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定

：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品
：

大鼠心营养素样细胞因子1(CLCF1)检测试剂盒 ，英文名
： CLCF1 ELISA Kit

Mouse heat shock protein 70 (HSP-70) ELISA Kit 小鼠热休克蛋白70(HSP-70)检测试剂盒

MouseFibrinogenDegradationProduct,FDPELISAKit 小鼠血纤蛋白原降解产物(FDP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanai-macrophageaibodyELISAKit人抗巨噬细胞抗体

细胞FLT3激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitGRH大鼠促生长激素释放激素

SMAD3重组小鼠 Smad3 蛋白 (His & GST 标签) Protein

高迁移率族蛋白1(HMG1)重组蛋白 Recombinant High Mobility Group Protein 1 (HMG1)

SHPK重组人 CARKL / SHPK 蛋白 Protein

FAM45A Protein Human 重组人 CAMK1 / CaMKI-alpha 蛋白

CD200R1L Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD200RLa 蛋白

高迁移率族蛋白1(HMG1)重组蛋白 Recombinant High Mobility Group Protein 1 (HMG1)

FAM45A Protein Human 重组人 CAMK1 / CaMKI-alpha 蛋白

SMAD3重组小鼠 Smad3 蛋白 (His & GST 标签) Protein

CD200R1L Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD200RLa 蛋白

SHPK重组人 CARKL / SHPK 蛋白 Protein

小鼠骨成型蛋白受体1A(BMPR-1A)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human growth hormone releasing factor (GH-RF) ELISA Kit 人生长激素释放因子(GH-RF)检测试剂盒

Humahymopein,TP-5ELISAKit 人五肽(TP-5)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanai-rubellavirusIgGaibody,ai-RVIgG检测试剂盒人抗风疹病毒IgG抗体(ai-RVIgG)检测试剂盒规格
：96T/48T

植物细胞周期G1期同步(SYNCHRONY)处理试剂盒10次

Humaubularbasememembraneaibogy,TBMELISAKit人抗肾小管基底膜抗体(TBM)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠尿道上皮细胞小鼠GRO(mouse GRO)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠神经胶质细胞衍化营养因子(mouse GDNF)   作用
：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠生长因子(mouse GH)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠心肌转录因子3(mouse GATA3)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清

。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。