老哥俱乐部

实验报告：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定
：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次

，每次10min

，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

大鼠脑微血管内皮分离自脑组织
；脑微血管内皮细胞是血脑屏障的主要组成成分
，它是组成脑微血管腔面单层扁平上皮样细胞，能够限制可溶性物质和细胞等从血液进入大脑，大脑微血管内皮细胞与外周内皮细胞相比具有一些相同特性
。它所产生和分泌的生物活性物质对维持血管张力
、调节血压
、抗血栓形成等有重要作用，在脑血管疾病的发病机制中有重要病理生理学意义。与外周内皮细胞相同，大脑微血管内皮细胞表面表达细胞粘附分子，调控白细胞进入大脑。由于微血管内皮细胞的器官特异性，内皮细胞通常取源于疾病研究的相关组织。其主要特征如下

：①脑微血管内皮细胞存在许多细胞间紧密连接，产生很高的跨内皮阻抗
，延迟细胞旁的通量；②脑微血管内皮细胞缺乏内皮细胞的窗孔结构，其液相物质胞饮水平较低

；③脑微血管内皮细胞具有不对称定位酶和载体介导转运系统
，从而产生“两极分化"的表现型

。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠脑微血管内皮采用胶原酶-混合消化法结合密度梯度离心法、后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠脑微血管内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息

：

包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好

，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片

，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片

，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流

。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

人脂0壁酸试剂盒   人脂0壁酸试剂盒   规格型号
：96T/48T   人脂0壁酸试剂盒，规格型号
：96T/48T
，来源
：试剂盒（进口分装）
，产品别名
：人脂0壁酸试剂盒、人脂0壁酸试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月
。

人脂联素试剂盒   人脂联素试剂盒   规格型号：96T/48T   人脂联素试剂盒，规格型号：96T/48T，来源
：试剂盒（进口分装），产品别名：人脂联素试剂盒、人脂联素试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月
。

人脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白试剂盒   人脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白试剂盒   规格型号

：96T/48T   人脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白试剂盒，规格型号
：96T/48T
，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：人脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白试剂盒、人脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期
：6个月
。

人脂肪酸结合蛋白试剂盒   人脂肪酸结合蛋白试剂盒   规格型号
：96T/48T   人脂肪酸结合蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源
：试剂盒（进口分装），产品别名：人脂肪酸结合蛋白试剂盒、人脂肪酸结合蛋白试剂盒   保存条件

：2-8℃   保质期：6个月
。

豚鼠肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)试剂盒
，英文名： iFABP ELISA Kit

Human multidrug resistance associated protein (MRP) ELISA Kit 人多药耐药相关蛋白(MRP)试剂盒

rabbitsolubleP-selectin,sP-selectinELISAKit 兔子可溶性P选择素(sP-selectin)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBetaGD(HumanBeta-glucuronidase)ELISAKit人β葡萄糖酸苷酶

细菌腺苷酸激酶(Adenylatekinase)活性酶连续循环比色法定量试剂盒20次

rabbithepatocytegrowthfactor,HGFELISAKit兔子肝细胞生长因子(HGF)试剂盒规格：96T/48T

SCGB1A1重组小鼠 Uteroglobin / SCGB1A1 蛋白 Protein

Enah/Vasp样蛋白(EVL)重组蛋白 Recombinant Enah/Vasp Like Protein (EVL)

MAG重组人 MAG / GMA / Siglec-4 蛋白 (Fc 标签) Protein

IL5RA Protein Human 重组人 IL5Ra / CD125 蛋白

GFRA1 Protein Rat 重组大鼠 GFRA1 / GFR alpha-1 蛋白

Enah/Vasp样蛋白(EVL)重组蛋白 Recombinant Enah/Vasp Like Protein (EVL)

IL5RA Protein Human 重组人 IL5Ra / CD125 蛋白

SCGB1A1重组小鼠 Uteroglobin / SCGB1A1 蛋白 Protein

GFRA1 Protein Rat 重组大鼠 GFRA1 / GFR alpha-1 蛋白

MAG重组人 MAG / GMA / Siglec-4 蛋白 (Fc 标签) Protein

大鼠脑微血管内皮细胞豚鼠白介素1β(IL1B)试剂盒 ，英文名： IL1B ELISA Kit

Human ubiquitin conjugating enzyme (E2/UBCE) ELISA Kit 人泛素结合酶(E2/UBCE)试剂盒

rabbitIerleukin6,IL-6ELISAKit 兔子白介素6(IL-6)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBeta-CG(HumanChorionicGonadoophinBeta)ELISAKit人绒毛膜β

细菌乙醇脱氢酶总活性(NDMA)比色法定量试剂盒20次

rabbitfollicle-stimulatinghormone,FSHELISAKit兔子促卵泡素(FSH)试剂盒规格：96T/48T