實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介：

大鼠腦微血管內皮分離自腦組織 ；腦微血管內皮細胞是血腦屏障的主要組成成分 ，它是組成腦微血管腔麵單層扁平上皮樣細胞 ，能夠限製可溶性物質和細胞等從血液進入大腦 ，大腦微血管內皮細胞與外周內皮細胞相比具有一些相同特性。它所產生和分泌的生物活性物質對維持血管張力 、調節血壓 、抗血栓形成等有重要作用 ，在腦血管疾病的發病機製中有重要病理生理學意義 。與外周內皮細胞相同 ，大腦微血管內皮細胞表麵表達細胞粘附分子 ，調控白細胞進入大腦 。由於微血管內皮細胞的器官特異性 ，內皮細胞通常取源於疾病研究的相關組織 。其主要特征如下 ：①腦微血管內皮細胞存在許多細胞間緊密連接 ，產生很高的跨內皮阻抗 ，延遲細胞旁的通量 ；②腦微血管內皮細胞缺乏內皮細胞的窗孔結構 ，其液相物質胞飲水平較低 ；③腦微血管內皮細胞具有不對稱定位酶和載體介導轉運係統 ，從而產生“兩極分化"的表現型 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的大鼠腦微血管內皮采用膠原酶-混合消化法結合密度梯度離心法 、後通過內皮細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠腦微血管內皮經CD31免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 PLL（0.1mg/ml） ，明膠（0.1%）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 內皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95%；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

人脂0壁酸試劑盒   人脂0壁酸試劑盒   規格型號 ：96T/48T   人脂0壁酸試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：人脂0壁酸試劑盒 、人脂0壁酸試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

人脂聯素試劑盒   人脂聯素試劑盒   規格型號：96T/48T   人脂聯素試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：人脂聯素試劑盒 、人脂聯素試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

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豚鼠腸脂肪酸結合蛋白(iFABP)試劑盒  ，英文名 ： iFABP ELISA Kit

Human multidrug resistance associated protein (MRP) ELISA Kit 人多藥耐藥相關蛋白(MRP)試劑盒

rabbitsolubleP-selectin,sP-selectinELISAKit 兔子可溶性P選擇素(sP-selectin)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBetaGD(HumanBeta-glucuronidase)ELISAKit人β葡萄糖酸苷酶

細菌腺苷酸激酶(Adenylatekinase)活性酶連續循環比色法定量試劑盒20次

rabbithepatocytegrowthfactor,HGFELISAKit兔子肝細胞生長因子(HGF)試劑盒規格 ：96T/48T

SCGB1A1重組小鼠 Uteroglobin / SCGB1A1 蛋白 Protein

Enah/Vasp樣蛋白(EVL)重組蛋白 Recombinant Enah/Vasp Like Protein (EVL)

MAG重組人 MAG / GMA / Siglec-4 蛋白 (Fc 標簽) Protein

IL5RA Protein Human 重組人 IL5Ra / CD125 蛋白

GFRA1 Protein Rat 重組大鼠 GFRA1 / GFR alpha-1 蛋白

Enah/Vasp樣蛋白(EVL)重組蛋白 Recombinant Enah/Vasp Like Protein (EVL)

IL5RA Protein Human 重組人 IL5Ra / CD125 蛋白

SCGB1A1重組小鼠 Uteroglobin / SCGB1A1 蛋白 Protein

GFRA1 Protein Rat 重組大鼠 GFRA1 / GFR alpha-1 蛋白

MAG重組人 MAG / GMA / Siglec-4 蛋白 (Fc 標簽) Protein

大鼠腦微血管內皮細胞豚鼠白介素1β(IL1B)試劑盒  ，英文名 ： IL1B ELISA Kit

Human ubiquitin conjugating enzyme (E2/UBCE) ELISA Kit 人泛素結合酶(E2/UBCE)試劑盒

rabbitIerleukin6,IL-6ELISAKit 兔子白介素6(IL-6)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBeta-CG(HumanChorionicGonadoophinBeta)ELISAKit人絨毛膜β

細菌乙醇脫氫酶總活性(NDMA)比色法定量試劑盒20次

rabbitfollicle-stimulatinghormone,FSHELISAKit兔子促卵泡素(FSH)試劑盒規格 ：96T/48T