老哥俱乐部

细胞简介：

大鼠脑膜分离自脑膜组织；脑膜是颅骨与脑间的隔膜，一共有三层，由外向内为硬脑膜、蛛网膜和软脑膜。脑膜细胞围绕着大脑，参与中枢神经系统的正常发育，能稳定脑软膜表面的细胞外基质、组织放射状胶质细胞网络和小脑皮层分层结构。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠脑膜采用消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠脑膜经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV
、支原体
、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息
：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养

：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min

；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min

；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗

，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照

。

公司正在出售的产品：

中文名称   方法   规格

大鼠髓过氧化物酶特异性抗粒细胞胞质抗体IgG(MPO-ANCAIgG)ELISAKit   ELISA. 

大鼠补体蛋白3(C3)ELISAKit   ELISA. 

大鼠(AZT)ELISAKit   ELISA.

猪白介素18(IL-18)ELISA 试剂盒

Human ai Sa aibody (ai-Sa-Ab) ELISA Kit 人抗Sa抗体(ai-Sa-Ab)试剂盒

Porcineierleukin10,IL-10ELISAKit 猪白介素10(IL-10)试剂盒 进口分装

CLIAKitforAIRA(Humanai-insulieceptoraibody)ELISAKit人抗胰岛素受体抗体

血液尿酸含量直接(TPTZ)比色法定量试剂盒50次

MouseUlasensitivityThyroxine,u-T4ELISAKit小鼠高敏甲状腺素(u-T4)试剂盒

FGFR4重组食蟹猴 FGFR4 / FGF Receptor 4 蛋白  Protein

MDM2 (urine double minute 2 0.5mgMDM2 (urine double minute 2) 双微体2癌基因抗原

IL21R重组人 IL-21R / Interleukin-21 Receptor 蛋白 (His 标签) Protein

AK4 Protein Human 重组人 AK4 / Adenylate Kinase 4 / AK3L1 蛋白

DDR1 Protein Mouse 重组小鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白 (His & GST 标签)

MDM2 (urine double minute 2 0.5mgMDM2 (urine double minute 2) 双微体2癌基因抗原

AK4 Protein Human 重组人 AK4 / Adenylate Kinase 4 / AK3L1 蛋白

FGFR4重组食蟹猴 FGFR4 / FGF Receptor 4 蛋白  Protein

DDR1 Protein Mouse 重组小鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白 (His & GST 标签)

IL21R重组人 IL-21R / Interleukin-21 Receptor 蛋白 (His 标签) Protein

大鼠脑膜细胞豚鼠白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)ELISA 试剂盒

Rat angiotensin conveing enzyme (ACE) ELISA Kit 大鼠血管紧张素转化酶(ACE)试剂盒

Humanglomerularbasememembraneaibogy,GBMELISAKit 人抗肾小球基底膜抗体(GBM)试剂盒 进口分装

HumanCyclophosphamide,CTX试剂盒人环0酰胺(CTX)试剂盒

组织HCV(HEPATITISVIRUSC)病毒定量PCR扩增试剂盒20次

HumanPoliomyelitisVirus,PV-IgGELISAKit人脊髓灰质病毒IgG(PV-IgG)试剂盒

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致

，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题

，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h


。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。