老哥俱乐部

细胞简介：

大鼠角膜内皮分离自眼角膜组织
；角膜位于眼球前壁的一层透明膜，约占纤维膜的前1/6，从后面看角膜呈正圆形
，从前面看为横椭圆形
。角膜厚度各部分不尽相同，中央部薄
。角膜有十分敏感的神经末梢
，如有外物接触角膜，眼睑便会不由自主地合上以保护眼睛。为了保持透明，角膜并没有血管，透过外界空气、泪液及房水获取养份及氧气
。角膜分为五层，由前向后依次为：上皮细胞层、前弹力层
、基质层、后弹力层、内皮细胞层
。角膜的高度透明性和光学性是正常发挥生理功能的必要条件之一，而角膜内皮细胞（CEC）在维持角膜的正常生理功能方面起重要作用。角膜内皮细胞是角膜内层的单层细胞，构成了后弹力层和房水之间的物理屏障，通过离子“泵"功能调节角膜中离子浓度和水分
，维持角膜的半脱水状态，保证角膜的正常厚度和透明度

。一旦角膜内皮细胞功能出现紊乱
，常导致角膜水肿而使角膜部分甚至失去透明性。角膜内皮细胞主要功能有：①角膜是的无血管的组织，具有透明的特性和合成许多蛋白的功能；②角膜内皮细胞对角膜透明性有重要作用；③角膜内皮细胞通过Na+-K+-ATP酶活性，维持角膜和房水内Na+梯度，防止水分渗入角膜内，维持角膜实质层相对脱水状态
，维持透明性。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠角膜内皮采用混合胶原酶消化结合内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来

，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠角膜内皮经NSE（神经元特异性烯醇化酶）免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息

：

包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

实验报告
：

一、分离与培养

：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s

，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定

：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2

、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min

；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照

。

公司正在出售的产品：

脂褐质测试盒   Lipfuscin test box

脂蛋白（a）[LP（a）]测试盒   Lipoprotein (a) [LP (a)] test case

游离脂肪酸（NEFA）测试盒   Free fatty acid (NEFA) test case

脂肪酶测试盒   Lipase test kit

植物B6(VB6)ELISA 试剂盒

Human ai Toxoplasma IgM aibody (ai-tox IgM) ELISA Kit 人抗弓形体IgM抗体(ai-tox IgM)试剂盒

PorcineFibrinogen,FbgELISAKit 猪血纤蛋白原(Fbg)试剂盒 进口分装

CLIAKitforAFP甲胎蛋白定性

血液血管紧张素Ⅰ转化酶1(ACE1)活性比色法定量试剂盒20次

Mousethioredoxieductase,xRELISAKit小鼠硫氧还蛋白还原酶(xR)试剂盒

TFPI重组人 TFPI 蛋白 (His 标签) Protein

胰淀素(IAPP)重组蛋白 Recombinant Islet Amyloid Polypeptide (IAPP)

HA重组甲型流感 H1N1 (A/Ohio/UR06-0091/2007) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签) Protein

ACVRL1 Protein Human 重组人 ALK-1 / ACVRL1 蛋白 (His 标签)

M. VIRIDIFACIENS NA Protein M.viridifaciens 重组绿色小单孢菌 神经酸酶 (Neuraminidase / NA) (高活性) (His 标签)

胰淀素(IAPP)重组蛋白 Recombinant Islet Amyloid Polypeptide (IAPP)

ACVRL1 Protein Human 重组人 ALK-1 / ACVRL1 蛋白 (His 标签)

TFPI重组人 TFPI 蛋白 (His 标签) Protein

M. VIRIDIFACIENS NA Protein M.viridifaciens 重组绿色小单孢菌 神经酸酶 (Neuraminidase / NA) (高活性) (His 标签)

HA重组甲型流感 H1N1 (A/Ohio/UR06-0091/2007) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签) Protein

大鼠角膜内皮细胞小鼠α半乳糖基抗体(Gal)ELISA 试剂盒

Rat aquaporin 2 (AQP-2) ELISA Kit 大鼠水通道蛋白2(AQP-2)试剂盒

Humanprogesteronereceptor,PGRELISAKit 人孕酮受体(PGR)试剂盒 进口分装

HumanChorionicGonadoophin,HCG试剂盒人绒毛膜(HCG)试剂盒

总微型RNA(miRNA)电泳法分离试剂盒20次

HumanSalmonellatyphiaigen,St-AgELISAKit人伤寒抗原(St-Ag)试剂盒

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象

，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min

，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。