老哥俱乐部

实验报告
：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织

，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2

、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s

，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置

；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h

；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

大鼠脊髓星形胶质分离自脊髓组织

；脊髓是细细的管束状的神经结构，位于脊柱的椎管内且被脊椎保护
；是源自脑的中枢神经系统延伸部分。中枢神经系统的细胞依靠复杂的联系来处理传递信息。脊髓的主要功能是传送脑与外周之间的神经信息。人和脊椎动物中枢神经系统的一部分，在椎管里面，上端连接延髓

，两旁发出成对的神经，分布到四肢、体壁和内脏。脊髓的内部有一个H形（蝴蝶型）灰质区，主要由神经细胞构成
；在灰质区周围为白质区，主要由有髓神经纤维组成；脊髓是许多简单反射的中枢
。脊髓两旁发出许多成对的神经（称为脊神经）分布到全身皮肤、肌肉和内脏器官。脊髓是周围神经与脑之间的通路，也是许多简单反射活动的低级中枢
。按脊神经的出入可把脊髓也分为相应的31节
，31对脊神经就是由不同的脊椎发出的。神经系统基本的结构和功能单位是神经元
，即神经细胞，其大小和外观在中枢神经系统中差异很大。但都具有胞体和树突
、轴突。胞体又叫核周体，内含神经丝、微管、内质网、游离核糖体和一个有明显核仁的核。一些大神经元突起的粗面内质网可用Nissl染色显示，在光镜下是灰蓝色斑块状，称为尼氏小体

。树突和轴突是神经元的突起
，能在神经元之间传递电冲动，突起的大小和形态各不相同，很难用常规的显微镜鉴别。

方法简介
：

公司实验室分离的大鼠脊髓星形胶质采用消化法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的大鼠脊髓星形胶质经GFAP免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin

、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形
、多角形

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%
；CO2
，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿

。

公司正在出售的产品：

人组织蛋白酶D(cath-D)试剂盒   96T/48T

人组织蛋白酶B(cath-B)试剂盒   96T/48T

人组蛋白H2b(histon-H2b)试剂盒   96T/48T

人组胺(HIS)试剂盒   96T/48T

豚鼠基质金属蛋白酶8(MMP8)试剂盒
，英文名

： MMP8 ELISA Kit

Human calcineurin (CaN) ELISA Kit 人钙调0酸酶(CaN)试剂盒

rabbitEndothelin1,ET-1ELISAKit 兔子内皮素1(ET-1)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBACE2(Humanbeta-siteAPP-cleavingenzyme2)ELISAKit人β位淀粉样前体蛋白裂解酶2

线虫二环氧丁烷(diepoxybane)诱导突变试剂盒10次

Rabbitcardiacisoformofopni,cELISAKit兔心肌特异性肌钙蛋白T(c)试剂盒规格：96T/48T

BID重组小鼠 BID 蛋白 (His & GST 标签) Protein

ACTH (Adrenorticotrophin hormons 0.5mgACTH (Adrenorticotrophin hormons)(18-39) 促肾上腺皮质激素(18-39)(抗原)

CABP5重组人 CABP3 / CABP5 蛋白 Protein

IL2 Protein Human 重组人 Interleukin-2 / IL-2 蛋白

IL2RG Protein Rat 重组大鼠 IL2RG / CD132 蛋白

催乳素(PRL)重组蛋白 Recombinant Prolactin (PRL)

IL2 Protein Human 重组人 Interleukin-2 / IL-2 蛋白

WIF1重组小鼠 WIF1 / WIF-1 蛋白 Protein

NT5E Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD73 / NT5E 蛋白

BTK重组人 Bruton Tyrosine Kinase / BTK Kinase 蛋白 Protein

大鼠脊髓星形胶质细胞小鼠β2糖蛋白1抗体IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)ELISA 试剂盒

Human vitamin D receptor (VD R) ELISA Kit 人受体(VD R)试剂盒

Humanai-zonapellucidaaibody,aZPELISAKit 人抗透明带抗体(aZP)试剂盒 96T/48T 进口分装

Humancholesterol,CH试剂盒人(CH)试剂盒规格

：96T/48T

紫外线处理DNA损伤彗星荧光试剂盒20次

HumansecretedphospholipaseA2,sPLA2ELISAKit人分泌型0脂酶A2(sPLA2)试剂盒规格：96T/48T