細胞簡介 ：

大鼠脊髓微血管內皮分離自脊髓組織 ；脊髓是細細的管束狀的神經結構 ，位於脊柱的椎管內且被脊椎保護 ；是源自腦的中樞神經係統延伸部分 。中樞神經係統的細胞依靠複雜的聯係來處理傳遞信息 。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的神經信息 。人和脊椎動物中樞神經係統的一部分 ，在椎管裏麵 ，上端連接延髓 ，兩旁發出成對的神經 ，分布到四肢 、體壁和內髒 。脊髓的內部有一個H形（蝴蝶型）灰質區 ，主要由神經細胞構成 ；在灰質區周圍為白質區 ，主要由有髓神經纖維組成 ；脊髓是許多簡單反射的中樞 。脊髓兩旁發出許多成對的神經（稱為脊神經）分布到全身皮膚 、肌肉和內髒器官 。微血管又稱毛細血管 。分布於各種組織和細胞間的最微細的血管 。介於微動脈和微靜脈之間 。平均直徑7～9微米 ，數量極多 ，成網狀分布 。管壁由一層內皮細胞及一薄層基膜組成 ，厚約0.5微米 。基膜外麵有薄層結締組織 ，其中有纖維細胞 、巨噬細胞和周細胞等 。最細的毛細血管由一個內皮細胞圍成管腔 ，較粗的毛細血管由2～3個內皮細胞圍成 。分布於肌肉組織 、神經組織和結締組織中的毛細血管 ，內皮細胞間為縫隙連接（縫隙寬150埃） ，稱連續毛細血管 ；分布於內分泌腺 、腎髒等處的毛細血管 ，除有縫隙連接外 ，細胞本身有許多小孔 ，（孔徑800～1000埃） ，稱有孔毛細血管 ；分布於肝 、脾 、骨髓及某些內分泌腺的毛細血管 ，管腔擴大 ，稱血竇 。毛細血管的管壁薄 、通透性大 、管徑細（8～10微米） 、數量多 、血流速度慢 ，這些特點使其成為血液與組織液進行物質交換的場所 ，又稱交換血管 。血竇（sinusoid）由毛細血管管腔擴大而成 ，竇壁的一般結構與毛細血管壁相同 ，由單層內皮細胞構成 ，內皮細胞膜上有窗孔 。不同器官的竇壁結構各有差別 。脾血竇的內皮細胞間有較寬裂隙 ；肝血竇內皮細胞是不連續的 ，有較寬的細胞隙（0.1～0.5微米） ；肝 、脾血竇的基膜不完整或無基膜 ，通透性比毛細血管大 ，較大的蛋白質和血細胞可以通過 。肝血竇壁內有枯否細胞，脾血竇內外有巨噬細胞 ，這兩種細胞都有吞噬能力 ，可吞噬清除血液中的異物 、細菌等有害物質 ，是機體單核巨噬細胞係統的重要組成分 。某些內分泌腺的血竇有連續的基膜 。

方法簡介 ：

實驗室分離的大鼠脊髓微血管內皮采用 - 膠原酶聯合消化法製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的大鼠脊髓微血管內皮經CD31免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 ：

培養信息 ：

包被條件 ：PLL（0.1mg/ml） ，明膠（0.1%）

培養基 ：含FBS 、EGF 、bFGF 、IGF、VEGF 、Heparin 、Hydrocortisone 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：內皮細胞樣

傳代特性 ：可傳2-3代

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

大鼠脊髓微血管內皮體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的培養狀態 。

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠多巴胺轉運蛋白(DAT)檢測試劑盒  ，英文名 ： DAT ELISA Kit

Porcine noradrenaline (NE) ELISA Kit 豬去甲(NE)檢測試劑盒

蝦特定基因序列(FC)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforLXA4(HumanLipoxinA4)ELISAKit人脂氧素A4

體液總抗氧化能力(TAC)比色法(ABTS)定量檢測試劑盒50次

ELISAKitVEGF雞血管內皮細胞生長因子

HA重組甲型流感 H1N1 (A/Ohio/UR06-0091/2007) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

Shiga-like toxin IIe variant subunit A 0139[Escherichia coli 0139] 大腸杆菌誌賀樣毒素Ⅱ型突變體(O139菌型 0.5mgShiga-like toxin IIe variant subunit A 0139[Escherichia coli 0139] 大腸杆菌誌賀樣毒素Ⅱ型突變體(O139菌型)

REG3A重組人 REG3A / HIP 蛋白 Protein

CCL28 Protein Human 重組人 CCL28 蛋白

IL6R Protein Human 重組人 IL6R / CD126 蛋白

Shiga-like toxin IIe variant subunit A 0139[Escherichia coli 0139] 大腸杆菌誌賀樣毒素Ⅱ型突變體(O139菌型 0.5mgShiga-like toxin IIe variant subunit A 0139[Escherichia coli 0139] 大腸杆菌誌賀樣毒素Ⅱ型突變體(O139菌型)

CCL28 Protein Human 重組人 CCL28 蛋白

HA重組甲型流感 H1N1 (A/Ohio/UR06-0091/2007) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

IL6R Protein Human 重組人 IL6R / CD126 蛋白

REG3A重組人 REG3A / HIP 蛋白 Protein

小鼠幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human granzyme A (Gzms-A) ELISA Kit 人顆粒酶A(Gzms-A)檢測試劑盒

Humaelaxin,RLNELISAKit 人鬆弛肽/鬆弛素(RLN)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitfor6-OHDA(Human6-hydroxydopamine)ELISAKit人6-羥多巴胺

銀染法組織端粒酶活性AP電泳分析試劑盒10次

MouseMelatonin,MTELISAKit小鼠褪黑素(MT)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

大鼠脊髓微血管內皮細胞血管內皮生長因子A   英文名稱 ：   vascuiar endothelial growth factor A   規格 ：      英文縮寫：   VEGF-A

血管內皮生長因子C   英文名稱 ：   vascuiar endothelial growth factor C   規格 ：      英文縮寫 ：   VEGF-C

血管內皮生長因子D   英文名稱 ：   vascuiar endothelial growth factor D   規格：      英文縮寫 ：   VEGF-D

血管內皮生長因子165   英文名稱 ：   vascuiar endothelial growth factor 165   規格 ：      英文縮寫 ：   VEGF165

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。