老哥俱乐部

细胞简介：

大鼠脊髓微血管内皮分离自脊髓组织
；脊髓是细细的管束状的神经结构
，位于脊柱的椎管内且被脊椎保护；是源自脑的中枢神经系统延伸部分。中枢神经系统的细胞依靠复杂的联系来处理传递信息
。脊髓的主要功能是传送脑与外周之间的神经信息。人和脊椎动物中枢神经系统的一部分，在椎管里面，上端连接延髓
，两旁发出成对的神经，分布到四肢


、体壁和内脏。脊髓的内部有一个H形（蝴蝶型）灰质区
，主要由神经细胞构成
；在灰质区周围为白质区，主要由有髓神经纤维组成；脊髓是许多简单反射的中枢
。脊髓两旁发出许多成对的神经（称为脊神经）分布到全身皮肤、肌肉和内脏器官。微血管又称毛细血管。分布于各种组织和细胞间的最微细的血管。介于微动脉和微静脉之间
。平均直径7～9微米
，数量极多，成网状分布。管壁由一层内皮细胞及一薄层基膜组成
，厚约0.5微米。基膜外面有薄层结缔组织，其中有纤维细胞、巨噬细胞和周细胞等
。最细的毛细血管由一个内皮细胞围成管腔，较粗的毛细血管由2～3个内皮细胞围成
。分布于肌肉组织、神经组织和结缔组织中的毛细血管，内皮细胞间为缝隙连接（缝隙宽150埃），称连续毛细血管；分布于内分泌腺、肾脏等处的毛细血管，除有缝隙连接外
，细胞本身有许多小孔，（孔径800～1000埃），称有孔毛细血管；分布于肝、脾、骨髓及某些内分泌腺的毛细血管，管腔扩大
，称血窦。毛细血管的管壁薄、通透性大、管径细（8～10微米）、数量多
、血流速度慢

，这些特点使其成为血液与组织液进行物质交换的场所
，又称交换血管。血窦（sinusoid）由毛细血管管腔扩大而成
，窦壁的一般结构与毛细血管壁相同
，由单层内皮细胞构成
，内皮细胞膜上有窗孔。不同器官的窦壁结构各有差别。脾血窦的内皮细胞间有较宽裂隙
；肝血窦内皮细胞是不连续的，有较宽的细胞隙（0.1～0.5微米）；肝
、脾血窦的基膜不完整或无基膜
，通透性比毛细血管大，较大的蛋白质和血细胞可以通过。肝血窦壁内有枯否细胞
，脾血窦内外有巨噬细胞，这两种细胞都有吞噬能力，可吞噬清除血液中的异物、细菌等有害物质，是机体单核巨噬细胞系统的重要组成分
。某些内分泌腺的血窦有连续的基膜。

方法简介
：

实验室分离的大鼠脊髓微血管内皮采用 - 胶原酶联合消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的大鼠脊髓微血管内皮经CD31免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等

：

培养信息

：

包被条件
：PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基：含FBS、EGF、bFGF、IGF
、VEGF、Heparin、Hydrocortisone、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：内皮细胞样

传代特性
：可传2-3代

消化液：0.25%

培养条件
：气相：空气
，95%
；CO2

，5%

大鼠脊髓微血管内皮体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养
，以此保证该细胞的培养状态
。

实验报告：

一
、分离与培养
：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s

，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液

，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min

，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠多巴胺转运蛋白(DAT)检测试剂盒 ，英文名： DAT ELISA Kit

Porcine noradrenaline (NE) ELISA Kit 猪去甲(NE)检测试剂盒

虾特定基因序列(FC)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CLIAKitforLXA4(HumanLipoxinA4)ELISAKit人脂氧素A4

体液总抗氧化能力(TAC)比色法(ABTS)定量检测试剂盒50次

ELISAKitVEGF鸡血管内皮细胞生长因子

HA重组甲型流感 H1N1 (A/Ohio/UR06-0091/2007) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

Shiga-like toxin IIe variant subunit A 0139[Escherichia coli 0139] 大肠杆菌志贺样毒素Ⅱ型突变体(O139菌型 0.5mgShiga-like toxin IIe variant subunit A 0139[Escherichia coli 0139] 大肠杆菌志贺样毒素Ⅱ型突变体(O139菌型)

REG3A重组人 REG3A / HIP 蛋白 Protein

CCL28 Protein Human 重组人 CCL28 蛋白

IL6R Protein Human 重组人 IL6R / CD126 蛋白

Shiga-like toxin IIe variant subunit A 0139[Escherichia coli 0139] 大肠杆菌志贺样毒素Ⅱ型突变体(O139菌型 0.5mgShiga-like toxin IIe variant subunit A 0139[Escherichia coli 0139] 大肠杆菌志贺样毒素Ⅱ型突变体(O139菌型)

CCL28 Protein Human 重组人 CCL28 蛋白

HA重组甲型流感 H1N1 (A/Ohio/UR06-0091/2007) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

IL6R Protein Human 重组人 IL6R / CD126 蛋白

REG3A重组人 REG3A / HIP 蛋白 Protein

小鼠幽门螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human granzyme A (Gzms-A) ELISA Kit 人颗粒酶A(Gzms-A)检测试剂盒

Humaelaxin,RLNELISAKit 人松弛肽/松弛素(RLN)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitfor6-OHDA(Human6-hydroxydopamine)ELISAKit人6-羟多巴胺

银染法组织端粒酶活性AP电泳分析试剂盒10次

MouseMelatonin,MTELISAKit小鼠褪黑素(MT)检测试剂盒规格
：96T/48T

大鼠脊髓微血管内皮细胞血管内皮生长因子A   英文名称：   vascuiar endothelial growth factor A   规格：      英文缩写：   VEGF-A

血管内皮生长因子C   英文名称
：   vascuiar endothelial growth factor C   规格
：      英文缩写：   VEGF-C

血管内皮生长因子D   英文名称：   vascuiar endothelial growth factor D   规格
：      英文缩写：   VEGF-D

血管内皮生长因子165   英文名称：   vascuiar endothelial growth factor 165   规格：      英文缩写：   VEGF165

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。