老哥俱乐部

细胞简介
：

大鼠骨分离自骨组织；骨组织的细胞成分包括骨原细胞、成骨细胞
、骨细胞和破骨细胞
。只有骨细胞存在于骨组织内，其他三种细胞均位于骨组织的边缘。骨细胞（Osteocyte）是人体骨骼中主要的细胞成分。在成年人骨骼中，骨细胞占细胞总数量的90%～95%
，大约是成骨细胞数量的20倍。骨细胞生长在骨骼内部的骨基质中
。骨细胞的细胞体呈梭形或类圆形

，位于基质构成的骨陷窝内
。与神经细胞类似，每个骨细胞具有大量向外延伸的突触，而这些突触均位于由骨基质构成的骨小管结构中。通过这些突触，骨细胞能够与骨表面的细胞

、周围其它的骨细胞进行“交流"。普遍认为，骨细胞起源于成骨细胞
。在骨形成的终末阶段，成骨细胞将可能有3种不同的归宿：分化成为骨细胞、转移至骨表面成为暂不活动的成骨细胞
、进入程序死亡过程（凋亡）
。骨细胞为扁椭圆形多突起的细胞，核亦扁圆、染色深
。胞质弱嗜碱性。电镜下
，胞质内有少量溶酶体


、线粒体和粗面内质网，高尔基复合体亦不发达。骨细胞夹在相邻两层骨板间或分散排列于骨板内。相邻骨细胞的突起之间有缝隙连接。在骨基质中，骨细胞胞体所占据的椭圆形小腔，称为骨陷窝，其突起所在的空间称骨小管。相邻的骨陷窝借骨小管彼此通连。骨陷窝和骨小管内均含有组织液
，骨细胞从中获得养分。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠骨采用胶原酶消化法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠骨经骨钙素免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形、多角形

传代特性 不增殖
；不传代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2
，5%

实验报告：

一、分离与培养

：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小

；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置

；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

质粒大量提取试剂盒   5T

PlasmidMaxiKit   10T

质粒中量提取试剂盒   50T

PlasmidMidiKit   100T

猪α干扰素(IFN-α)ELISA 试剂盒

Human ai albumin aibody (AAA) ELISA Kit 人抗白蛋白抗体(AAA)试剂盒

PorcineIerleukin6,IL-6ELISAKit 猪白介素6(IL-6)试剂盒 进口分装

CLIAKitforAHA(Humanai-Histoneaibody)ELISAKit人抗组蛋白抗体

血液牛病毒性腹泻病毒I型(BovineViralDiarrhoeaVirus-1;BVDV-1)定量PCR扩增试剂盒20次

MouseTumornecrosisfactorsolublereceptorⅠ,TNFsR-ⅠELISAKit小鼠坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)试剂盒

IGFBP4重组人 IGFBP4 蛋白 (His 标签) Protein

视网膜母细胞瘤蛋白1(RB1)重组蛋白 Recombinant Retinoblastoma Protein 1 (RB1)

HIST2H4A重组人 Histone H4 / HIST2H4A 蛋白 Protein

AGRP Protein Human 重组人 AgRP / AGRP 蛋白 (His 标签)

HA Protein H5N8 重组甲型流感 H5N8 (A/duck/NY/191255-59/2002) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签)

视网膜母细胞瘤蛋白1(RB1)重组蛋白 Recombinant Retinoblastoma Protein 1 (RB1)

AGRP Protein Human 重组人 AgRP / AGRP 蛋白 (His 标签)

IGFBP4重组人 IGFBP4 蛋白 (His 标签) Protein

HA Protein H5N8 重组甲型流感 H5N8 (A/duck/NY/191255-59/2002) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签)

HIST2H4A重组人 Histone H4 / HIST2H4A 蛋白 Protein

大鼠骨细胞小鼠解偶联蛋白1(UCP1)ELISA 试剂盒

Rat ai cardiolipin aibody IgM (ACA-IgM) ELISA Kit 大鼠抗心0脂抗体IgM(ACA-IgM)试剂盒

HumanCalreticulin,CELISAKit 人钙网蛋白(C)试剂盒 进口分装

Humanai-calmodulinspecificaibody,CaM-ab试剂盒人抗钙调素特异抗体(CAM-ab)试剂盒

植物核同糖1,5二0酸羧化/加氧酶(RUBPCase/Rubisco)加氧活性定量试剂盒20次

Humanα-glathioneS-ansferases，α-GSTELISAKit人αS转移酶(α-GST)试剂盒

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态

、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞

。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。