老哥俱乐部

实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基

，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二

、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下

，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

大鼠肝实质分离自肝脏组织
；肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官，并在身体里面起着去氧化、储存肝糖
、分泌性蛋白质的合成等作用；肝脏也制造消化系统中之胆汁
。肝脏是机体内脏里大的器官，位于机体中的腹部位置，在右侧横隔膜之下
，位于胆囊之前端且于右边肾脏的前方
，胃的上方
。肝脏是机体消化系统中大的消化腺
，为一红棕色的V字形器官。肝脏是尿素合成的主要器官，又是新陈代谢的重要器官
。肝脏在机体位置和形态结构：肝脏位于右上腹，隐藏在右侧膈下和肋骨深面
，大部分肝为肋弓所复盖
，仅在腹上区
、右肋弓间露出并直接接触腹前壁，肝上面则与膈及腹前壁相接
。肝实质细胞是指具有肝功能的单位，是肝脏的基本组成单位之一。肝实质细胞与主要病生理变化
：急性肝炎、肝硬化、肝脓肿。肝实质细胞属于中高度分化细胞
，生长营养需求高
，在体外存活时间短
；细胞呈圆形或多角形，核大而圆
，居中
，常染色质丰富
，部分有双核或多倍体核
。肝脏作为体内重要的器官，在整个物质代谢过程中具有广泛而多样的作用。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠肝实质采用混合酶灌流消化
、反复低速离心制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠肝实质经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息

：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注

：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞

。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿

。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品
：

小鼠特异生长因子/相关因子(TSGF)试剂盒   96T/48T

小鼠坏死因子样弱凋亡因子（TWEAK）试剂盒   96T/48T

小鼠坏死因子相关凋亡诱导配体4(AIL-R4)试剂盒   96T/48T

小鼠坏死因子相关凋亡诱导配体3(AIL-R3)试剂盒   96T/48T

小鼠天门冬酸基转移酶(AST)试剂盒 96T/48T

Human chondroitin sulfate (CS) ELISA Kit 人软骨素(CS)试剂盒

HumanMannoseELISAKit 人甘露糖(Mannose)试剂盒 96T/48T 进口分装

ChickenansformingGrowthfactorβ2,TGF-β2试剂盒鸡转化生长因子β2(TGF-β2)试剂盒规格：96T/48T

载玻片细胞RyR受体蛋白表达荧光显微镜试剂盒10/20次

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rh-EGF(Recombinant Epidermal growth factor 0.1mgrh-EGF(Recombinant Epidermal growth factor)

SERPINF2重组人 SerpinF2 / SERPINF2 蛋白 Protein

CGA Protein Human 重组人 FSH alpha / TSH alpha / CGA 蛋白

HMGB1 Protein Human 重组人 HMGB1 / HMG1 蛋白 (Fc 标签)

rh-EGF(Recombinant Epidermal growth factor 0.1mgrh-EGF(Recombinant Epidermal growth factor)

CGA Protein Human 重组人 FSH alpha / TSH alpha / CGA 蛋白

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大鼠肝实质细胞小鼠硫氧还蛋白还原酶(xR)ELISA 试剂盒

Neuroophic factor of rat glial cell line derived (GDNF) ELISA Kit 大鼠胶质细胞系来源的神经营养因子(GDNF)试剂盒

Humanneurofilameprotein,NFELISAKit 人神经丝蛋白(NF)试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanactivatedproteinC,APC试剂盒人活化蛋白C(APC)试剂盒规格：96T/48T

脂质过氧化物反式十八碳四烯酸(cis-parinaricacid)ELISA定量测定试剂盒48/96次

MouseAngiotensinconveingenzyme,ACEELISAKit小鼠血管紧张素转化酶(ACE)试剂盒规格：96T/48T