細胞簡介 ：

大鼠肺微血管平滑肌分離自肺組織 ；肺是機體的呼吸器官 ，位於胸腔 ，左右各一 ，覆蓋於心之上 。肺有分葉 ，左二右三 ，共五葉 。肺經肺係（指氣管 、支氣管等）與喉 、鼻相連 ，故稱喉為肺之門戶 ，鼻為肺之外竅 。肺血管平滑肌細胞原代分離培養3天後 ，可見細胞貼壁伸展 ，細胞形態大小不一 ，呈梭形 、不規則形 、三角形或扇形 ，核卵圓形 、居中 ；2周後細胞匯合，多數細胞伸展呈長梭形 ，胞漿豐富 ，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區域多層重疊生長 ，高低起伏 ；細胞密度低時 ，常交織成網狀 ；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀 。傳代後細胞生長較快 ，4-6天即可匯合 ，並保持上述形態學特征和生長特點 。肺血管平滑肌細胞主要功能 ：①細胞表麵表達介質（ICAM-1和VCAM-1）參與血管壁炎症反應 ；②是多數重要動脈疾病的靶細胞 。肺血管平滑肌細胞與主要病生理變化 ：①平滑肌增生易致肺動脈高壓 ；②先天性肺動脈狹窄 ；③肺動脈栓塞 。血管平滑肌細胞的加速生長潛能是血管疾病進展的關鍵因素 ，研究表明血管平滑肌細胞表達的ICAM-1和VCAM-1能促進血管壁的炎症反應 ，並且與血管疾病的發展及穩定性有關 。

方法簡介 ：

實驗室分離的大鼠肺微血管平滑肌采用混合膠原酶消化法製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的大鼠肺微血管平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 ：含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：成纖維細胞樣

傳代特性 ：可傳2-3代左右

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

大鼠肺微血管平滑肌體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的培養狀態 。

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠酶(CAT)檢測試劑盒  ，英文名 ： CAT ELISA Kit

Rabbit acetylcholine receptor aibody (AChRab) ELISA Kit 兔乙酰受體抗體(AChRab)檢測試劑盒

呼吸道合胞病毒(RSV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMMP-9/GelatinaseB(Humanmaixmetalloproteinase9/GelatinaseB)ELISAKit人基質金屬蛋白酶9/明膠酶B

體液基質金屬蛋白酶(MMP)總活性熒光定量檢測試劑盒20次

ELISAKitTXB2犬血栓素B2

CD3D & CD3E重組小鼠 CD3D & CD3E Heterodimer 蛋白 Protein

胱天蛋白酶7(CASP7)重組蛋白 Recombinant Caspase 7 (CASP7)

CARTPT重組人 CART / CARTPT 蛋白 (Fc 標簽) Protein

CASP14 Protein Human 重組人 Caspase-14 / CASP14 蛋白

IL17RD Protein Canine 重組狗 IL17RD 蛋白

胱天蛋白酶7(CASP7)重組蛋白 Recombinant Caspase 7 (CASP7)

CASP14 Protein Human 重組人 Caspase-14 / CASP14 蛋白

CD3D & CD3E重組小鼠 CD3D & CD3E Heterodimer 蛋白 Protein

IL17RD Protein Canine 重組狗 IL17RD 蛋白

CARTPT重組人 CART / CARTPT 蛋白 (Fc 標簽) Protein

小鼠組胺(HIS)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human ai glycoprotein aibody (GP) ELISA Kit 人抗糖蛋白抗體(GP)檢測試劑盒

HumanBeta-HydroxybyricAcid,β-OHBELISAKit 人β羥(β-OHB)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforACEI(HumanAngiotensinIConveingEnzyme)ELISAKit人血管緊張素Ⅰ轉化酶

藥品糖精(saccharin)含量比色法定量檢測試劑盒20次

MouseParathyroidHormoneRelatedProtein,PTHrPELISAKit小鼠甲狀旁腺激素相關蛋白(PTHrP)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

大鼠肺微血管平滑肌細胞鴨特定基因序列(Duck)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

鴨特定基因序列(Duck)核酸檢測試劑盒   48T

鵝特定基因序列(Goose)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

鵝特定基因序列(Goose)核酸檢測試劑盒   48T

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。