老哥俱乐部

细胞简介：

大鼠肺微血管平滑肌分离自肺组织
；肺是机体的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆盖于心之上。肺有分叶
，左二右三，共五叶。肺经肺系（指气管、支气管等）与喉、鼻相连，故称喉为肺之门户，鼻为肺之外窍。肺血管平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形
、不规则形
、三角形或扇形
，核卵圆形
、居中
；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形
，胞浆丰富
，有分枝状突起
，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状
；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状
。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点
。肺血管平滑肌细胞主要功能：①细胞表面表达介质（ICAM-1和VCAM-1）参与血管壁炎症反应
；②是多数重要动脉疾病的靶细胞。肺血管平滑肌细胞与主要病生理变化：①平滑肌增生易致肺动脉高压；②先天性肺动脉狭窄；③肺动脉栓塞。血管平滑肌细胞的加速生长潜能是血管疾病进展的关键因素，研究表明血管平滑肌细胞表达的ICAM-1和VCAM-1能促进血管壁的炎症反应，并且与血管疾病的发展及稳定性有关。

方法简介：

实验室分离的大鼠肺微血管平滑肌采用混合胶原酶消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的大鼠肺微血管平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定

，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV
、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息
：

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态
：成纤维细胞样

传代特性：可传2-3代左右

消化液：0.25%

培养条件
：气相：空气，95%；CO2，5%

大鼠肺微血管平滑肌体外培养周期有限
；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养
，以此保证该细胞的培养状态
。

实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次

，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液


，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠酶(CAT)检测试剂盒 ，英文名
： CAT ELISA Kit

Rabbit acetylcholine receptor aibody (AChRab) ELISA Kit 兔乙酰受体抗体(AChRab)检测试剂盒

呼吸道合胞病毒(RSV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CLIAKitforMMP-9/GelatinaseB(Humanmaixmetalloproteinase9/GelatinaseB)ELISAKit人基质金属蛋白酶9/明胶酶B

体液基质金属蛋白酶(MMP)总活性荧光定量检测试剂盒20次

ELISAKitTXB2犬血栓素B2

CD3D & CD3E重组小鼠 CD3D & CD3E Heterodimer 蛋白 Protein

胱天蛋白酶7(CASP7)重组蛋白 Recombinant Caspase 7 (CASP7)

CARTPT重组人 CART / CARTPT 蛋白 (Fc 标签) Protein

CASP14 Protein Human 重组人 Caspase-14 / CASP14 蛋白

IL17RD Protein Canine 重组狗 IL17RD 蛋白

胱天蛋白酶7(CASP7)重组蛋白 Recombinant Caspase 7 (CASP7)

CASP14 Protein Human 重组人 Caspase-14 / CASP14 蛋白

CD3D & CD3E重组小鼠 CD3D & CD3E Heterodimer 蛋白 Protein

IL17RD Protein Canine 重组狗 IL17RD 蛋白

CARTPT重组人 CART / CARTPT 蛋白 (Fc 标签) Protein

小鼠组胺(HIS)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human ai glycoprotein aibody (GP) ELISA Kit 人抗糖蛋白抗体(GP)检测试剂盒

HumanBeta-HydroxybyricAcid,β-OHBELISAKit 人β羟(β-OHB)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforACEI(HumanAngiotensinIConveingEnzyme)ELISAKit人血管紧张素Ⅰ转化酶

药品糖精(saccharin)含量比色法定量检测试剂盒20次

MouseParathyroidHormoneRelatedProtein,PTHrPELISAKit小鼠甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)检测试剂盒规格
：96T/48T

大鼠肺微血管平滑肌细胞鸭特定基因序列(Duck)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T

鸭特定基因序列(Duck)核酸检测试剂盒   48T

鹅特定基因序列(Goose)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T

鹅特定基因序列(Goose)核酸检测试剂盒   48T

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好

，培养液是否有漏液、浑浊等现象

，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞

，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞

，并接种到新的培养瓶或培养皿中

，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用

。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。