實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

大鼠多巴胺神經元分離腦組織 ；多巴胺神經元 ，即 ：胺能神經元，主要指含多巴胺的神經元 ，其細胞體主要分布在黑質 、腳間核和丘腦下部等處。在這些區域多巴胺含量很高 。多巴胺在機體內合成時以酪為原料 。腦內的多巴胺主要是由黑質細胞來合成 ，這些多巴胺參與錐體外係統的活動 ，與軀體運動機能有密切關係 。腦內多巴胺代謝失常時 ，可引起震顫性麻痹(帕金森震顫) 。多巴胺(Dopamine) ，是NA的前體物質 ，是下丘腦和腦垂體腺中的一種關鍵神經遞質 ，中樞神經係統中多巴胺的濃度受精神因素的影響 ，神經末梢的GnRH和多巴胺間存在著軸突聯係並相互作用 ，以及多巴胺有抑製GnRH分泌的作用 。中腦的神經原物質多巴胺(Dopamine) ，則直接影響人們的情緒 。從理論上來看 ，增加這種物質 ，就能讓人興奮 ，但是它會令人上癮 。多巴胺在前腦和基底神經節(Basal Ganglia)出現 ，基底神經節負責處理恐懼的情緒 ，但由於多巴胺的緣故 ，取代了恐懼的感覺 ，因此有很多人的上癮行為 ，都是因多巴胺而起的 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的大鼠多巴胺神經元采用消化法 、神經元專用培養基培養篩選結合化學試劑抑製法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠多巴胺神經元經TH免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養基 含B-27 Supplement 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 神經元細胞樣

傳代特性 屬於終末分化細胞 ；屬於不增殖細胞群

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)檢測試劑盒  ，英文名 ： PPAR-γ ELISA Kit

Rabbit angiotensin II (ANG- II) ELISA Kit 兔血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)檢測試劑盒

腸道病毒通用型(EV-U)核酸檢測試劑盒(-PCR法) 48T

CLIAKitforMN(Humanmetanephrine)ELISAKit人變

體液基質金屬蛋白酶125I同位素標記檢測試劑盒20次

ELISAKitISR-β犬胰島素受體β

IL4重組狗 IL4 / Interleukin-4 蛋白 Protein

Oct-4(Octamer-4 0.5mgOct-4(Octamer-4) 胚胎幹細胞關鍵蛋白抗原

NLGN1重組人 Neuroligin 1 / NLGN1 蛋白 Protein

CARTPT Protein Human 重組人 CART / CARTPT 蛋白 (Fc 標簽)

GPC3 Protein Mouse 重組小鼠 Glypican 3 / GPC3 / OCI-5 蛋白

Oct-4(Octamer-4 0.5mgOct-4(Octamer-4) 胚胎幹細胞關鍵蛋白抗原

CARTPT Protein Human 重組人 CART / CARTPT 蛋白 (Fc 標簽)

IL4重組狗 IL4 / Interleukin-4 蛋白 Protein

GPC3 Protein Mouse 重組小鼠 Glypican 3 / GPC3 / OCI-5 蛋白

NLGN1重組人 Neuroligin 1 / NLGN1 蛋白 Protein

小鼠組織多肽抗原(TPA)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human ai mouse aibody (HAMA) ELISA Kit 人抗鼠抗體(HAMA)檢測試劑盒

Human20-hydroxyeicosateaenoicacid,12-HETEELISAKit 人12羥二十烷四烯酸(12-HETE)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforACE(MouseAngiotensinconveingenzyme)ELISAKit小鼠血管緊張素轉化酶

藥品甘素(dulcin)含量高效液相色譜法定量檢測試劑盒20次

Mouseperoxisomeproliferatorsactivatorreceptorsalpha,PPAR-αELISAKit小鼠過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

大鼠多巴胺神經元細胞鴨子酶(CA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

中文名稱   方法   規格

鴨抗凝血素抗體(aPT1/aPT2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

雞17羥皮質類固醇(17-OHCS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T