老哥俱乐部

实验报告：

一
、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清

，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养

；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min

；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜

；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

大鼠多巴胺神经元分离脑组织
；多巴胺神经元，即：胺能神经元，主要指含多巴胺的神经元，其细胞体主要分布在黑质、脚间核和丘脑下部等处。在这些区域多巴胺含量很高。多巴胺在机体内合成时以酪为原料。脑内的多巴胺主要是由黑质细胞来合成，这些多巴胺参与锥体外系统的活动，与躯体运动机能有密切关系。脑内多巴胺代谢失常时
，可引起震颤性麻痹(帕金森震颤)
。多巴胺(Dopamine)，是NA的前体物质，是下丘脑和脑垂体腺中的一种关键神经递质
，中枢神经系统中多巴胺的浓度受精神因素的影响，神经末梢的GnRH和多巴胺间存在着轴突联系并相互作用，以及多巴胺有抑制GnRH分泌的作用。中脑的神经原物质多巴胺(Dopamine)，则直接影响人们的情绪
。从理论上来看
，增加这种物质，就能让人兴奋
，但是它会令人上瘾
。多巴胺在前脑和基底神经节(Basal Ganglia)出现
，基底神经节负责处理恐惧的情绪，但由于多巴胺的缘故，取代了恐惧的感觉，因此有很多人的上瘾行为，都是因多巴胺而起的
。

方法简介
：

公司实验室分离的大鼠多巴胺神经元采用消化法
、神经元专用培养基培养筛选结合化学试剂抑制法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠多巴胺神经元经TH免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml）

培养基 含B-27 Supplement、Penicillin

、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 神经元细胞样

传代特性 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好

，培养液是否有漏液

、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片

，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片

，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

大鼠过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPAR-γ)检测试剂盒 
，英文名
： PPAR-γ ELISA Kit

Rabbit angiotensin II (ANG- II) ELISA Kit 兔血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)检测试剂盒

肠道病毒通用型(EV-U)核酸检测试剂盒(-PCR法) 48T

CLIAKitforMN(Humanmetanephrine)ELISAKit人变

体液基质金属蛋白酶125I同位素标记检测试剂盒20次

ELISAKitISR-β犬胰岛素受体β

IL4重组狗 IL4 / Interleukin-4 蛋白 Protein

Oct-4(Octamer-4 0.5mgOct-4(Octamer-4) 胚胎干细胞关键蛋白抗原

NLGN1重组人 Neuroligin 1 / NLGN1 蛋白 Protein

CARTPT Protein Human 重组人 CART / CARTPT 蛋白 (Fc 标签)

GPC3 Protein Mouse 重组小鼠 Glypican 3 / GPC3 / OCI-5 蛋白

Oct-4(Octamer-4 0.5mgOct-4(Octamer-4) 胚胎干细胞关键蛋白抗原

CARTPT Protein Human 重组人 CART / CARTPT 蛋白 (Fc 标签)

IL4重组狗 IL4 / Interleukin-4 蛋白 Protein

GPC3 Protein Mouse 重组小鼠 Glypican 3 / GPC3 / OCI-5 蛋白

NLGN1重组人 Neuroligin 1 / NLGN1 蛋白 Protein

小鼠组织多肽抗原(TPA)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human ai mouse aibody (HAMA) ELISA Kit 人抗鼠抗体(HAMA)检测试剂盒

Human20-hydroxyeicosateaenoicacid,12-HETEELISAKit 人12羟二十烷四烯酸(12-HETE)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforACE(MouseAngiotensinconveingenzyme)ELISAKit小鼠血管紧张素转化酶

药品甘素(dulcin)含量高效液相色谱法定量检测试剂盒20次

Mouseperoxisomeproliferatorsactivatorreceptorsalpha,PPAR-αELISAKit小鼠过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)检测试剂盒规格

：96T/48T

大鼠多巴胺神经元细胞鸭子酶(CA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

中文名称   方法   规格

鸭抗凝血素抗体(aPT1/aPT2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

鸡17羟皮质类固醇(17-OHCS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T