老哥俱乐部

细胞简介：

大鼠表皮角化分离自皮肤组织
；表皮位于动物皮肤的外层，由胚胎时期外胚层形成，具有抗摩擦和抗损伤的作用。表皮是皮肤的浅层结构
，由复层扁平上皮构成。从基底层到表面可分为五层，即基底层
、棘层、颗粒层
、透明层和角质层
。表皮角化细胞（KC）是构成表皮的主要细胞成分，在体内处于不断增殖过程中，分裂的角化细胞主要位于其基底层，少数位于棘细胞层
。随着向表层的推移，细胞的分化程度逐渐增加
，并丧失分裂活性。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠表皮角化上皮先消化、后-胶原酶混合消化法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠表皮角化上皮经PCK免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS
、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-3代左右
；2代以内状态好

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气，95%；CO2，5%

实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织

，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s

，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃

，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠白介素12(IL-12)检测试剂盒 
，英文名： IL-12 ELISA Kit

Rabbit basic fibroblast growth factor (bFGF) ELISA Kit 兔子碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)检测试剂盒

ELISA 小鼠瘦素(mouse Leptin)  进口分装

CLIAKitforIL-27(MouseIerleukin27)ELISAKit小鼠白介素27

通用型球菌(Staphylococcusaureus)试剂盒20次

ELISAKitPDGF-BB大鼠血小板衍生生长因子BB

SPARC重组小鼠 Osteonectin / SPARC 蛋白 Protein

ANGPTL1/ANG-1 (Angiopoietin-like Protein 1 0.5mgANGPTL1/ANG-1 (Angiopoietin-like Protein 1) 血管位蛋白样1/血管生成素样蛋白-1抗原

AMPK重组人 AMPK (G1/B1/A1) Heterotrimer 蛋白 Protein

CAMK2B Protein Human 重组人 CAMK2B / CaMKII-beta 蛋白 (His & GST 标签)

CD38 Protein Rat 重组大鼠 SCARB3 蛋白 (Fc 标签)

白血病抑制因子受体(LIFR)重组蛋白 Recombinant Leukemia Inhibitory Factor Receptor (LIFR)

CAMK2B Protein Human 重组人 CAMK2B / CaMKII-beta 蛋白 (His & GST 标签)

CPA2重组小鼠 Carboxypeptidase A2 / CPA2 蛋白 Protein

IL6ST Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 IL6ST / gp130 蛋白 (Fc 标签)

EPHB2重组人 EphB2 / Hek5 蛋白 Protein

鸭病毒性肠病毒(DEV)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human ai-pl7-aibody (ai-cailage-Ab) ELISA Kit 人抗软骨抗体(ai-cailage-Ab)检测试剂盒

HumanEndotheliallipase,ELELISAKit 人内皮脂肪酶(EL)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforACSELISAKit大鼠脂酰合成酶

亚甲基蓝(METHYLENEBLUE)复染试剂盒50次

MouseplateletaibodiesIgG/M/A,PA-IgG/M/AELISAKit小鼠抗血小板抗体IgG/M/A(PA-IgG/M/A)检测试剂盒规格
：96T/48T

大鼠表皮角化上皮细胞英文名称：   Total Niic Oxide   规格：      英文缩写：   NO

自然杀伤细胞   英文名称：   Natural killer Cells   规格：      英文缩写：   NK

杆菌抗体   英文名称：   Mycobacterium Tuberculosis Aibody   规格
：      英文缩写：   TB

谷酰胺   英文名称
：   ansglaminase   规格：      英文缩写
：   TG

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面

，显微镜下观察细胞状态

。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞

，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养

。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。