實驗報告 ：

一、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

大鼠NG2分離自腦組織 ；大腦分左右兩個半球 ，大腦皮質（灰質）覆蓋著每個大腦半球的大部分 ，它是神經元胞體集中的地方 。內部則是由神經纖維或髓鞘構成的白質 。每一個半球都有三個麵 ，即外側麵（約占整個皮質麵積的1/3） 、內側麵和底麵（占2/3的麵積） ；半球表麵有很多深淺不等的溝或裂 ，溝或裂之間的隆起叫回 ，它們大大增加了大腦的表麵積 ；大腦外側麵重要的溝 、裂有大腦外側裂 、頂枕裂和中央溝 。由於三溝裂之界隔 ，使大腦皮質組分為額葉 、頂葉 、顳葉 、枕葉四大部分 。NG2細胞是在發育和成年中樞神經係統的灰質和白質束中發現的 ，因表達NG2蛋白多糖而得名 。NG2細胞先前被假定代表少突膠質細胞前體細胞 ，後來使用轉基因的研究表明 ，NG2細胞在體內不僅能夠產生少突膠質細胞 ，還能產生原漿性星形膠質細胞以及某些情況下的神經元 。NG2細胞是中樞神經係統中不同於神經元 、成熟少突膠質細胞 、星形膠質細胞和小膠質細胞的一類細胞亞群 。此外 ，在發育和成年中樞神經係統的多個區域 ，發現NG2細胞和神經元之間存在的突觸聯係 ，暗示NG2細胞除了可能作為分化成多種細胞的可塑性前體細胞群 ，還可能會和神經元聯係從而形成一個的神經膠質網絡 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的大鼠NG2采用消化 、專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠NG2經NG2免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 梭形 、多角形

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠成纖維細胞生長因子23(FGF-23)檢測試劑盒  ，英文名 ： FGF-23 ELISA Kit

Mouse B cell lymphoma factor 2 (Bcl-2) ELISA Kit 小鼠B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)檢測試劑盒

ELISA 小鼠可溶性白細胞分化抗原40配體(mouse sCD40L)  進口分裝

CLIAKitforLepIgG(HumanLeptospiraIgG)ELISAKit人鉤端IgG

通用型HSV(HERPESSIMPLX)病毒定量PCR擴增檢測試劑盒20次

ELISAKitIL-1白介素1

IFNA2重組食蟹猴 IFNA2 / Interferon alpha 2 蛋白 Protein

IRF-1(Interferon regulatory factor-1 0.5mgIRF-1(Interferon regulatory factor-1) 幹擾素調節因子抗原

FLRT2重組人 FLRT2 蛋白 Protein

GPNMB Protein Human 重組人 GPNMB / Osteoactivin 蛋白 (Fc 標簽)

IFNA2 Protein Mouse 重組小鼠 IFNA2 / Interferon alpha 2 蛋白 (Fc 標簽)

IRF-1(Interferon regulatory factor-1 0.5mgIRF-1(Interferon regulatory factor-1) 幹擾素調節因子抗原

GPNMB Protein Human 重組人 GPNMB / Osteoactivin 蛋白 (Fc 標簽)

IFNA2重組食蟹猴 IFNA2 / Interferon alpha 2 蛋白 Protein

IFNA2 Protein Mouse 重組小鼠 IFNA2 / Interferon alpha 2 蛋白 (Fc 標簽)

FLRT2重組人 FLRT2 蛋白 Protein

小鼠β內酰胺酶抑製劑(BLI)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat somatostatin (SS) ELISA Kit 大鼠(SS)檢測試劑盒

HumanCollagenaseIELISAKit 人膠原酶I(CollagenaseI)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanCeruloplasmin,CP/CER檢測試劑盒人銅藍蛋白(CP/CER)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

轉基因玉米MON810品係試劑盒20次

HumanSerotonin,STELISAKit人血清素/血清胺(ST)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

大鼠NG2細胞兔子E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子結合蛋白4(RBP-4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子主要組織相容性複合體Ⅲ類(MHCⅢ/RLAⅢ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔淋巴細胞功能相關抗原3(LFA-3/CD58)ELISAKit   ELISA.   96T/48T