老哥俱乐部

实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次

，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min

，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

大鼠NG2分离自脑组织；大脑分左右两个半球
，大脑皮质（灰质）覆盖着每个大脑半球的大部分
，它是神经元胞体集中的地方。内部则是由神经纤维或髓鞘构成的白质。每一个半球都有三个面，即外侧面（约占整个皮质面积的1/3）、内侧面和底面（占2/3的面积）
；半球表面有很多深浅不等的沟或裂，沟或裂之间的隆起叫回，它们大大增加了大脑的表面积
；大脑外侧面重要的沟
、裂有大脑外侧裂、顶枕裂和中央沟
。由于三沟裂之界隔，使大脑皮质组分为额叶
、顶叶、颞叶、枕叶四大部分。NG2细胞是在发育和成年中枢神经系统的灰质和白质束中发现的
，因表达NG2蛋白多糖而得名。NG2细胞先前被假定代表少突胶质细胞前体细胞
，后来使用转基因的研究表明，NG2细胞在体内不仅能够产生少突胶质细胞，还能产生原浆性星形胶质细胞以及某些情况下的神经元。NG2细胞是中枢神经系统中不同于神经元
、成熟少突胶质细胞、星形胶质细胞和小胶质细胞的一类细胞亚群。此外
，在发育和成年中枢神经系统的多个区域
，发现NG2细胞和神经元之间存在的突触联系
，暗示NG2细胞除了可能作为分化成多种细胞的可塑性前体细胞群，还可能会和神经元联系从而形成一个的神经胶质网络。

方法简介
：

公司实验室分离的大鼠NG2采用消化
、专用培养基培养筛选制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠NG2经NG2免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体
、细菌
、酵母和真菌等

。

培养信息
：

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形
、多角形

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%；CO2

，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品
：

大鼠成纤维细胞生长因子23(FGF-23)检测试剂盒 
，英文名： FGF-23 ELISA Kit

Mouse B cell lymphoma factor 2 (Bcl-2) ELISA Kit 小鼠B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)检测试剂盒

ELISA 小鼠可溶性白细胞分化抗原40配体(mouse sCD40L)  进口分装

CLIAKitforLepIgG(HumanLeptospiraIgG)ELISAKit人钩端IgG

通用型HSV(HERPESSIMPLX)病毒定量PCR扩增检测试剂盒20次

ELISAKitIL-1白介素1

IFNA2重组食蟹猴 IFNA2 / Interferon alpha 2 蛋白 Protein

IRF-1(Interferon regulatory factor-1 0.5mgIRF-1(Interferon regulatory factor-1) 干扰素调节因子抗原

FLRT2重组人 FLRT2 蛋白 Protein

GPNMB Protein Human 重组人 GPNMB / Osteoactivin 蛋白 (Fc 标签)

IFNA2 Protein Mouse 重组小鼠 IFNA2 / Interferon alpha 2 蛋白 (Fc 标签)

IRF-1(Interferon regulatory factor-1 0.5mgIRF-1(Interferon regulatory factor-1) 干扰素调节因子抗原

GPNMB Protein Human 重组人 GPNMB / Osteoactivin 蛋白 (Fc 标签)

IFNA2重组食蟹猴 IFNA2 / Interferon alpha 2 蛋白 Protein

IFNA2 Protein Mouse 重组小鼠 IFNA2 / Interferon alpha 2 蛋白 (Fc 标签)

FLRT2重组人 FLRT2 蛋白 Protein

小鼠β内酰胺酶抑制剂(BLI)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat somatostatin (SS) ELISA Kit 大鼠(SS)检测试剂盒

HumanCollagenaseIELISAKit 人胶原酶I(CollagenaseI)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanCeruloplasmin,CP/CER检测试剂盒人铜蓝蛋白(CP/CER)检测试剂盒规格

：96T/48T

转基因玉米MON810品系试剂盒20次

HumanSerotonin,STELISAKit人血清素/血清胺(ST)检测试剂盒规格
：96T/48T

大鼠NG2细胞兔子E选择素(E-Selectin/CD62E)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子结合蛋白4(RBP-4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子主要组织相容性复合体Ⅲ类(MHCⅢ/RLAⅢ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔淋巴细胞功能相关抗原3(LFA-3/CD58)ELISAKit   ELISA.   96T/48T