細胞簡介 ：

大鼠Ⅱ型肺泡上皮分離自肺組織 ；肺泡由單層上皮細胞構成的半球狀囊泡 。肺中的支氣管經多次反複分枝成無數細支氣管，它們的末端膨大成囊 ，囊的四周有很多突出的小囊泡 ，即為肺泡 。小肺泡細胞 ，又稱I型肺泡細胞 ，厚約0.1微米 ，基底部是基底膜 ，無增殖能力 。大肺泡細胞 ，又稱Ⅱ型肺泡細胞 ，分泌表麵活性物質（二棕櫚酰） ，以降低肺泡表麵張力 。Ⅱ型肺泡細胞位於Ⅰ型肺泡細胞之間 ，數量較Ⅰ型肺泡細胞多 ，但覆蓋麵積比Ⅰ型肺泡細胞小 。細胞立方形或圓形,頂端突入肺泡腔 。細胞核圓形 ，胞質著色淺 、呈泡沫狀 。電鏡下 ，細胞遊離而有少量微絨毛 ，胞質內富含線粒體和溶酶體 ，有較發達的粗麵內質網和高爾基複合體 。核上方有較多的分泌顆粒 ，電子密度高 、大小不等 ，直徑約0.1-1.0μm顆粒內含有平行排列的板層狀結構 ，稱為嗜餓性板層小體 。小體內的主要成分為磷脂 ，以二棕櫚酰為主 ，此外還有糖胺多糖及蛋白質等 。顆粒內物質釋放出來後 ，在肺泡表麵形成一層粘液層 ，稱為表麵活性物質（surfactant） 。表麵活性物質有降低肺泡表麵張力 、穩定肺泡大小的作用 。呼氣時肺泡縮小 ，表麵活性物質密度增加 ，表麵張力降低 ，防止肺泡過度塌陷 ；吸氣時肺泡擴張 ，表麵活性物質密度減小 ，肺泡回縮力加大 ，可防止肺泡過度膨脹 。表麵活性物質的缺乏或變性均可引起肺不張 ，過度通氣可造成表麵活性物質缺乏 ；吸入毒氣可直接破壞表麵活性物質 。Ⅱ型肺泡細胞有分裂 、增殖並分化為Ⅰ型肺泡細胞的潛能 ，故具有修複受損傷上皮的作用 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的大鼠Ⅱ型肺泡上皮采用彈性蛋白酶灌注消化法結合差速貼壁法 ，並通過上皮細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠Ⅱ型肺泡上皮經SP-C免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

小鼠血管緊張素 I (mouse ANG I)   作用 ：   ELISA   規格 ：   96T   美國 Phoenix

小鼠血管緊張素 II (mouse ANG II)   作用 ：   ELISA   規格 ：   96T   美國 Phoenix

mouse CD 40L ELISA Kit   作用 ：   ELISA   規格 ：   96T   奧地利 Bender

大鼠 C 反應蛋白 (rat CRP)   作用 ：   ELISA   規格 ：   96T   美國 ADI

小鼠仙台病毒(Sendai)試劑盒 96T/48T

Rat bone morphogenetic protein 4 (BMP-4) ELISA Kit 大鼠骨成型蛋白4(BMP-4)試劑盒

Humanproteinase-aineuophilcytoplasmicaibody,PR3-ANCAELISAKit 人蛋白酶3特異性抗中性粒細胞胞質抗體(PR3-ANCA)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Chickenheparansulfate,HS試劑盒雞類肝素(HS)試劑盒規格 ：96T/48T

載玻片細胞CDK4蛋白表達熒光顯微鏡試劑盒10/20次

MouseHeatShockProtein70,Hsp-70ELISAKit小鼠熱休克蛋白70(HSP-70)試劑盒規格 ：96T/48T

CCL2重組小鼠 CCL2 / MCP-1 / MCP1 蛋白 Protein

1α(MEP1α)重組蛋白 Recombinant Meprin A Alpha (MEP1a)

RIOK1重組人 RIOK1 / RIO kinase 1 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

CDC37 Protein Human 重組人 CDC37 / CDC37A 蛋白 (GST 標簽)

IgG Protein Rabbit 重組兔 IgG-Fc 蛋白 (185 Thr/Ala, Asn 284/Ser)

1α(MEP1α)重組蛋白 Recombinant Meprin A Alpha (MEP1a)

CDC37 Protein Human 重組人 CDC37 / CDC37A 蛋白 (GST 標簽)

CCL2重組小鼠 CCL2 / MCP-1 / MCP1 蛋白 Protein

IgG Protein Rabbit 重組兔 IgG-Fc 蛋白 (185 Thr/Ala, Asn 284/Ser)

RIOK1重組人 RIOK1 / RIO kinase 1 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

大鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞豬組織因子(TF)ELISA 試劑盒

Peroxisome proliferator activated receptor alpha (PPAR- alpha) ELISA Kit 人過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)試劑盒

Rabbitalpha-granularmembraneprotein,GMP-140ELISAKit 兔血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforApo-H(HumanApolipoproteinH)ELISAKit人載脂蛋白H

溴脫氧尿核苷(BrdU)溶液(100毫摩爾)1毫升

Porcinemyelinbasicprotein,MBPELISAKit豬髓0脂堿性蛋白(MBP)試劑盒規格 ：96T/48T

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。