老哥俱乐部

细胞简介

：

毛囊的上皮是由表皮延伸而来，主要分为外根鞘和内根鞘。其中，外根鞘相当于表皮的基底层和棘细胞层，由数层不含色素的细胞组成。外根鞘细胞与表皮细胞相比具有更强的增殖活性。此外，有研究表明，胰岛素与 EGF对外根鞘细胞的增殖具有明显的促进作用。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的正常皮肤组织
。

2)细胞鉴定：细胞角蛋白-19((CK-19)荧光染色为阳性
。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV
、HCV、支原体
、
、酵母和
。

5)细胞生长方式
：铺路石状细胞，不规则细胞，贴壁培养。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 Delf 上皮 细胞 培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次

，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置

；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后

，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃

，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下

，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5

、PBS冲洗细胞3次

，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

小鼠可溶性Toll样受体9(sTLR9/sCD289)elisa检测试剂盒

小鼠5羟基吲哚乙酸(5-HIAA)elisa检测试剂盒

植物总RNA纯化试剂盒（低多糖/酚）

甲磺酸乙脂突变诱导试剂盒

DMEM无糖培养基 500ml

细胞内氧化应激活性氧（ROS）初级绿色荧光测定试剂盒

甘油激酶 EC2.7.1.30 10KU/瓶

化妆品三氯蔗糖（sucralose）含量高效液相色谱法定量检测试剂盒

小鼠丙型肝炎抗体(IgG)elisa检测试剂盒

转录因子SP4抗体 Transcription factor Sp4

组酸性磷酸酶结构域蛋白2A抗体 HISPPD2A/IP6 Kinase

核帽结合蛋白2样蛋白抗体 NCBP2L

核转录调节因子YY1抗体 YY1

NT5D1蛋白抗体 NT5D1

Pacific Blue标记小鼠CD45.1单克隆抗体 mouse CD45.1/Pacific Blue

上皮细胞有丝分裂蛋白抗体 Epigen

神经细胞胞浆蛋白9.5/蛋白基因产物9.5单克隆抗体 UCHL1/PGP9.5

DNA聚合酶ε/DNA pol ε抗体 DNA Polymerase epsilon

EFCAB1蛋白抗体 EFCAB1

磷酸化应元件调节蛋白抗体 phospho-CREM (Ser271 + Ser274)

磷酸化上皮细胞癌转化蛋白2抗体 phospho-ECT2 (Thr373)

补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白2抗体 CTRP2

成纤维细胞生长因子11抗体 FGF11

小脑锌指ZIC4蛋白抗体 ZIC4

锌指蛋白782抗体 ZNF782

大鼠神经介素B(NMB)elisa检测试剂盒

大鼠血管生成素样蛋白6(ANGPTL6)elisa检测试剂盒

细胞氧化应激活性氧（ROS）光泽精化学发光法定量检测试剂盒

豚鼠黄体(LH)elisa分析检测试剂盒

大鼠外根鞘细胞DNA探针聚合酶整合标记试剂盒

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基

、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。