老哥俱乐部

细胞简介
：

胃壁一般由 3层组织构成
，内层是粘膜层
，外层是浆膜层,中间是由平滑肌组成的肌层。成纤维细胞是结缔组织中常见的细胞，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞的主要功能之一是合成胶原蛋白及其他细胞外基质
，在组织器官纤维化过程中发挥重要作用。

细胞特性
：

1）组织来源于实验动物的正常胃组织
。

2)细胞鉴定：纤维连接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）荧光染色为阳性
。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体

、

、酵母和。

5)细胞生长方式：长梭形细胞，不规则细胞，贴壁培养
。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 Delf 原代成纤维 细胞 培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后

，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次

，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面

，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞

，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞

，并接种到新的培养瓶或培养皿中

，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

大鼠白介素8(IL-8/CXCL8)检测试剂盒 ，英文名： IL-8/CXCL8 ELISA Kit

Mouse ierleukin 13 (IL-13) ELISA Kit 小鼠白介素13(IL-13)检测试剂盒

ELISA 小鼠神经胶质细胞衍化营养因子(mouse GDNF)  进口分装

CLIAKitfori-PTHELISAKit大鼠全段甲状旁腺素

通用型非洲(Africanswinefevervirus;ACSF)试剂盒20次

ELISAKitLPL大鼠脂蛋白脂酶

JAM2重组小鼠 JAM-2 / JAM-B 蛋白 (Fc 标签)(Fc 标签) Protein

Annexin A 膜粘连蛋白 A抗原 0.5mgAnnexin A 膜粘连蛋白 A抗原

ADIPOQ重组人 Adiponectin / Acrp30 / ADIPOQ 蛋白 (Fc 标签) Protein

EPOR & CD131 Protein Human 重组人 EPOR & CD131 Homodimer 蛋白

CD59 Protein Rat 重组大鼠 CD59 / CD59A / MAC-IP 蛋白 (Fc 标签)

白细胞关联免疫球蛋白样受体2(LAIR2)重组蛋白 Recombinant Leukocyte Associated Immunoglobulin Like Receptor 2 (LAIR2)

EPOR & CD131 Protein Human 重组人 EPOR & CD131 Homodimer 蛋白

RETN重组小鼠 Resistin / ADSF / RETN 蛋白 (Fc 标签) Protein

REG1B Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 REG1B / PSPS2 蛋白 (Fc 标签)

MERTK重组人 MERTK / Mer (aa 578-872) 蛋白 Protein

小鼠肌酸激酶(CK)检测试剂盒 96T/48T

Human myelin protein 2 (P2) ELISA Kit 人神经髓鞘蛋白(p2)检测试剂盒

HumanLinkerforactivationofTcell,LATELISAKit 人T细胞活化连接蛋白(LAT)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanai-Ku-aibody检测试剂盒人抗Ku抗体(ai-Ku-Ab)检测试剂盒规格
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植物弥散吲哚-3-乙酸(IAA)荧光定量检测试剂盒(包括萃取)20次

HumanVaricellazostervirusIgM，VZVIgMELISAKit人水痘带状疱疹病毒IgM(VZV-IgM)检测试剂盒规格
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大鼠胃成纤维细胞小鼠白介素27(IL-27)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠白介素23(IL-23)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠心肌营养素1(CT-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠抗α-胞衬蛋白抗体IgG/IgA(α-FodrinIgG/IgA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T