老哥俱乐部

细胞简介
：

睾丸实质由三层结构组成的囊包绕：外层是鞘膜，中间为白膜，里面是血管膜
。

睾丸的动脉供应有三个来源
：睾丸动脉及其分支、输精管动脉和提睾肌动脉
。在一些男性，超过 90%的睾丸血供来自睾丸动脉，睾丸血供的中断可导致睾丸。间质中的微血管称为小管间血管，精曲小管周围的梯状微血管 称为管周微血管。

细胞特性：

1）组织来源于人的正常睾丸组织。

2)细胞鉴定：VWF荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%
。

4)不含有 HIV-1
、 HBV、HCV、支原体
、、酵母和。

5)细胞生长方式：铺路石样
，不规则细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 delf原代 内皮 细胞培养体系 作为该细胞的培养基。

实验报告

：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小

；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2


、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4

、按1: 100的比例稀释α-actin一抗

，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h

。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠成肌分化蛋白(MyoD)检测试剂盒 ，英文名： MyoD ELISA Kit

Rat bladder tumor aigen (BTA) ELISA Kit 大鼠膀胱肿瘤抗原(BTA)检测试剂盒

RatN-terminalprocollagenⅢpropeptide,PⅢNPELISAKit 大鼠Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforCR(HumanCalretinin)ELISAKit人钙结合蛋白

细胞氧化型(GSSG)浓度比色法定量检测试剂盒50次

RatCyclin-D2ELISAKit大鼠细胞周期素D2(Cyclin-D2)检测试剂盒

DKK1重组人 DKK1 / Dkk-1 蛋白 (His 标签) Protein

趋化因子C-C-基元配体3样蛋白1(CCL3L1)重组蛋白 Recombinant Chemokine C-C-Motif Ligand 3 Like Protein 1 (CCL3L1)

CD1B & B2M重组人 CD1B & B2M Heterodimer 蛋白 Protein

ABHD4 Protein Human 重组人 ABHD4 蛋白 (His 标签)

NP Protein H2N2 重组甲型流感 H2N2 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) (His 标签)

趋化因子C-C-基元配体3样蛋白1(CCL3L1)重组蛋白 Recombinant Chemokine C-C-Motif Ligand 3 Like Protein 1 (CCL3L1)

ABHD4 Protein Human 重组人 ABHD4 蛋白 (His 标签)

DKK1重组人 DKK1 / Dkk-1 蛋白 (His 标签) Protein

NP Protein H2N2 重组甲型流感 H2N2 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) (His 标签)

CD1B & B2M重组人 CD1B & B2M Heterodimer 蛋白 Protein

鱼脱酶2(DIO2)ELISA检测试剂盒 ELISA 组装/原装

Human ai IgM aibody to hepatitis A virus (ai-HAV) ELISA Kit 人抗甲型肝病毒IgM抗体(ai-HAV)检测试剂盒

swinemajorhistocompatibilitycomplexⅡ,MHCⅡ/SLAⅡELISAKit 猪主要组织相容性复合体Ⅱ类(MHCⅡ/SLAⅡ)检测试剂盒 进口分装

ADVIgGVII腺病毒IgGⅦ型(间接法二步法)

血液乙醇脱氢酶III(S-亚硝基谷胱苷肽还原酶)活性比色法定量检测试剂盒20次

MousesolubleendothelialproteinCreceptor,sEPCRELISAKit小鼠可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)检测试剂盒

人睾丸血管内皮细胞愈创木酚   50g

Guaiacol   100g

盐酸胍   100g

GuanidineHydrochloride   500g