老哥俱乐部

细胞简介：

角质形成细胞是一种不断分化的复层鳞状上皮细胞，其分化的终阶是形成角蛋白。根据角质形成细胞的发展阶段和特点，从内向外可将其分为五层。基底细胞层又称层，棘细胞层，颗粒层

，透明层，角质层。

角质形成细胞的分化成熟表现为从基底层到向角质层的逐渐移行。在单一移行过程中
，角质形成 ;细胞的形状和功能也逐渐发生着变化
，从单层柱状上皮的基底层到扁平的细胞核消失的角质层。新生的基底细胞进入棘细胞层
，然后上移到颗粒层的上层。

细胞特性
：

1） 细胞来源于人皮肤组织。

2） 细胞鉴定：广谱角蛋白 ((Pan Cytokeratin)荧光染色为阳性。

3） 经鉴定细胞纯度高于 90%。

4） 不含有 HIV-1
、 HBV
、HCV、支原体
、、酵母和。

5） 细胞生长方式：上皮样细胞，贴壁培养。

该细胞传代时
，建议提前将培养瓶 /培养板进行预包被。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 Delf 原代成纤维细胞 培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告
：

一

、分离与培养
：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s

，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下

，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4

、按1: 100的比例稀释α-actin一抗

，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h

；

6
、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题

，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞

，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品
：

小鼠内脏脂肪特异性丝酸蛋白酶抑制剂(vaspin)ELISA 试剂盒

Rat basic fibroblast growth factor 4 (bFGF-4) ELISA Kit 大鼠碱性成纤维细胞生长因子4(bFGF-4)检测试剂盒

HumanCytotoxin-associatedprotein,CagAELISAKit 人细胞毒素相关蛋白A(CagA)检测试剂盒 进口分装

Human6-keto-prostaglandinF1a,6-K-PGF1a检测试剂盒人6同前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)检测试剂盒

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MouseAi-myocardialaibody,AMAELISAKit小鼠抗心肌抗体(AMA)检测试剂盒

HAVCR2重组小鼠 TIM3 / HAVCR2 蛋白  Protein

核糖体蛋白L23A(RPL23A)重组蛋白 Recombinant Ribosomal Protein L23A (RPL23A)

TMED4重组人 TMED4 / ERS25 蛋白 (His 标签) Protein

ACRV1 Protein Human 重组人 SP-10 / ACRV1 蛋白 (His 标签)

ANGPTL7 Protein Canine 重组狗 ANGPTL7 / Angiopoietin-like 7 蛋白 (His 标签)

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植物茉莉酸(JA)检测试剂盒

Human ai fibrillarin aibodies (AFA/snoRNP/U3RNP) ELISA Kit 人抗核仁纤维蛋白抗体(AFA/snoRNP/U3RNP)检测试剂盒

Porcineinsulin-likegrowthfactors2,IGF-2ELISAKit 猪胰岛素样生长因子2(IGF-2)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforAFA/snoRNP/U3RNP(Humanai-fibrillarinaibody)ELISAKit人抗核仁纤维蛋白抗体

血液血管紧张素Ⅰ转化酶2(ACE2)活性荧光共振能量转移法(FRET)定量检测试剂盒20次

MouseSubstanceP,SPELISAKit小鼠P物质(SP)检测试剂盒

人角质形成细胞脂多糖   10mg

Lipopolysaccharides,Escherichiacoli055:B5

L-异亮酸   10g

L-Isoleucine   50g