老哥俱乐部

细胞简介：

结肠在右髂窝内续于盲肠，在第 3骶椎平面连接直肠
。结肠分升结肠、横结肠
、降结肠和乙状结肠4部，大部分固定于腹后壁

，结肠的排列酷似英文字母M
，将小肠包围在内。

结肠癌发病主要与高脂肪和低纤维素饮食有关
。结肠癌是常见的发生于结肠部位的消化道恶性肿瘤
。好发于直肠与乙状结肠交界处。其发病率占胃肠道肿瘤的第三位。结肠癌主要分为腺癌
、粘液腺癌和未分化癌
。

细胞特性：

1）细胞来源于人结肠癌组织。

2)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、、酵母和
。

3)细胞生长方式：梭形，不规则细胞
，贴壁培养
。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 delf 原代肿瘤细胞培养体系 作为体外培养的培养基
。

实验报告：

一、分离与培养
：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4

、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min

，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

小鼠脑肠肽(BGP/Gehrelin)ELISA 试剂盒

Rat basic fibroblast growth factor (bFGF) ELISA Kit 大鼠碱性成纤维生长因子(bFGF)检测试剂盒

HumaeplicationproteinA,RPA-70ELISAKit 人复制蛋白A(RPA-70)检测试剂盒 进口分装

Human5-Nucleotidase,5-检测试剂盒人5核苷酸酶(5-)检测试剂盒

真菌天青曙红(Azure-eosinate)染色试剂盒50次

Mouseai-oligodendrocyte-myelinglycoproteinaibody,OMgp-AbELISAKit小鼠少突胶质细胞髓鞘糖蛋白抗体(OMgp-Ab)检测试剂盒

BMP2重组斑马鱼 BMP-2 / BMP2A 蛋白 Protein

TRAF2/TNF-R2 (TNF receptor-associated factor 2 0.5mlTRAF2/TNF-R2 (TNF receptor-associated factor 2) 坏死因子受体相关因子2抗原

ACVRL1重组人 ALK-1 / ACVRL1 蛋白 (His 标签) Protein

ACTR3 Protein Human 重组人 ACTR3 蛋白 (His & GST 标签)

TFPI Protein Human 重组人 TFPI 蛋白 (His 标签)

TRAF2/TNF-R2 (TNF receptor-associated factor 2 0.5mlTRAF2/TNF-R2 (TNF receptor-associated factor 2) 坏死因子受体相关因子2抗原

ACTR3 Protein Human 重组人 ACTR3 蛋白 (His & GST 标签)

BMP2重组斑马鱼 BMP-2 / BMP2A 蛋白 Protein

TFPI Protein Human 重组人 TFPI 蛋白 (His 标签)

ACVRL1重组人 ALK-1 / ACVRL1 蛋白 (His 标签) Protein

植物茉莉酸甲酯(MeJA)ELISA 试剂盒

Human ai nucleolus aibody (ANA) ELISA Kit 人抗核仁抗体(ANA)检测试剂盒

Porcineinsulin-likegrowthfactors-1,IGF-1ELISAKit 猪胰岛素样生长因子1(IGF-1)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforaFABP(Humanadipocytefattyacid-bindingprotein)ELISAKit人脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白

血液血管紧张素Ⅰ转化酶2(ACE2)活性荧光定量检测试剂盒20次

MouseSuperOxidaseDimase,SODELISAKit小鼠超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒

人结肠癌细胞脂肪酶（LPS）试剂盒   可见分光光度法   50管/48样

醇脱氢酶（ADH）试剂盒   紫外分光光度法    50管/48样

脂氧合酶（LOX）试剂盒   紫外分光光度法    50管/48样

酰基转移酶（AAT）试剂盒   可见分光光度法   10管/9样

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿

。