老哥俱乐部

细胞简介：

脐带血是胎儿出生时脐带内及胎盘近胎儿一侧血管内的血液。脐带血中含有多种成分
。目前

，脐带血已经成为的造血干细胞的重要来源之一
。此外
，脐带血中还含有丰富的间充质干细胞
。

脐带血中的干细胞含量丰富，明显超过外周血含量
，相当或超过骨髓中的含量，其间充质干细胞因其可以在体外诱导分化为多种组织细胞，以再生和修复病变或损伤的组织细胞
，因此目前的应用比较广泛。

细胞特性
：

1）细胞来源于脐血。

2)细胞鉴定
：CD44荧光染色为阳性
。

3)经鉴定细胞纯度高于90%
。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体
、
、酵母和
。

5)细胞生长方式：梭形细胞
，不规则细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 Delf原代间充质干细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告
：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置

，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1

、待心房肌细胞生长至80%融合时

，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗

，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

山羊白介素10(IL-10)ELISA 试剂盒

Rat apolipoprotein A1 (apo-A1) ELISA Kit 大鼠载脂蛋白A1(apo-A1)检测试剂盒

HumanGlathioneperoxidase,GSH-PxELISAKit 人过氧化酶(GSH-Px)检测试剂盒 进口分装

Humanheatshockprotein27,HSP-27检测试剂盒人热休克蛋白27(HSP-27)检测试剂盒

组织Q含量比色法定量检测试剂盒20次

Humanmaixmetalloproteinase5,MMP-5ELISAKit人基质金属蛋白酶5(MMP-5)检测试剂盒

CD59重组大鼠 CD59 / CD59A / MAC-IP 蛋白  Protein

FRA1/FOSL1 peptide FRA-1多肽蛋白 1mgFRA1/FOSL1 peptide FRA-1多肽蛋白

EPOR & CD131重组人 EPOR & CD131 Homodimer 蛋白 Protein

ADIPOQ Protein Human 重组人 Adiponectin / Acrp30 / ADIPOQ 蛋白

JAM2 Protein Mouse 重组小鼠 JAM-2 / JAM-B 蛋白

FRA1/FOSL1 peptide FRA-1多肽蛋白 1mgFRA1/FOSL1 peptide FRA-1多肽蛋白

ADIPOQ Protein Human 重组人 Adiponectin / Acrp30 / ADIPOQ 蛋白

CD59重组大鼠 CD59 / CD59A / MAC-IP 蛋白  Protein

JAM2 Protein Mouse 重组小鼠 JAM-2 / JAM-B 蛋白

EPOR & CD131重组人 EPOR & CD131 Homodimer 蛋白 Protein

植物血凝素/凝集素(PHA)检测试剂盒

Human ai calpastatin aibody (ACAST-D IV) ELISA Kit 人抗钙蛋白酶抑素抗体(ACAST-DⅣ)检测试剂盒

PorcineImmunoglobulinM,IgMELISAKit 猪免疫球蛋白M(IgM)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforAFP-L3(Humanalpha-fetoproteinLensculinarisaggliin3)ELISAKit人小扁结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体3

血液A高效液相色谱法定量检测试剂盒20次

MouseThyroidStimulatingHormone,TSHELISAKit小鼠促甲状腺素(TSH)检测试剂盒

人脐血间充质干细胞植物类黄测试盒   可见分光光度法   50管/24样

植物总酚测试盒   可见分光光度法   50管/24样

植物原测试盒   可见分光光度法   50管/24样

尿酸含量测试盒   可见分光光度法   50管/48样