老哥俱乐部

细胞简介：

韧带属于以弹性纤维为主的致密结缔组织
。粗大的弹性纤维或平行排列成束，如项韧带和黄韧带。韧带白色带状的结缔组织，质坚韧，有弹性，能把骨骼连接在一起，并能固定某些脏器如肝、脾、肾等的位置
。韧带附着于骨骼的可活动部分，但限制其活动范围以免损伤
。当遭受暴力
，产生非生理性活动，韧带被牵拉而超过其耐受力时，即会发生损伤。

细胞特性：

1）细胞来源于手术取得的正常人关节韧带组织
。

2)细胞鉴定

：纤维连接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1
、 HBV、HCV、支原体、
、酵母和
。

5)细胞生长方式
：成纤维样细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 Delf原代成纤维细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下

，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）

，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液

，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次

，直至组织被消化


；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基


，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min

，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品


：

大鼠果糖二0酸缩酶C(ALDOC)检测试剂盒 ，英文名： ALDOC ELISA Kit

Rat Apelin 12 (AP12) ELISA Kit 大鼠apelin 12(AP12)检测试剂盒

Ratamyloidbetapeptide1-42,Aβ1-42ELISAKit 大鼠β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforENA-Ab(Humanai-exactablenuclearaigenaibody)ELISAKit人抗可提取核抗原抗体

细胞络0酸酶(TP)活性比色法定量检测试剂盒20次

RatLDL-ICELISAKit大鼠低密度脂蛋白免疫复合物(LDL-IC)检测试剂盒

IL27RA重组人 IL27Ra / TCCR / WSX1 蛋白  Protein

速受体1(TACR1)重组蛋白 Recombinant Tachykinin Receptor 1 (TACR1)

TNFRSF11A重组人 TNFRSF11A 蛋白 (His 标签) Protein

ADIPOQ Protein Human 重组人 CAMK1D / CKLiK 蛋白 (GST 标签)

HA Protein H5N1 重组甲型流感 H5N1 (A/Cambodia/R0405050/2007) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签)

速受体1(TACR1)重组蛋白 Recombinant Tachykinin Receptor 1 (TACR1)

ADIPOQ Protein Human 重组人 CAMK1D / CKLiK 蛋白 (GST 标签)

IL27RA重组人 IL27Ra / TCCR / WSX1 蛋白  Protein

HA Protein H5N1 重组甲型流感 H5N1 (A/Cambodia/R0405050/2007) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签)

TNFRSF11A重组人 TNFRSF11A 蛋白 (His 标签) Protein

植物吲哚乙酸(IAA)ELISA 试剂盒

Human ai parainfluenza virus IgG aibody (ai-PIV IgG) ELISA Kit 人抗副流感病毒IgG抗体(ai-PIV IgG )检测试剂盒

PorcineImmunoglobulinE,IgEELISAKit 猪免疫球蛋白E(IgE)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforAFU(Humanalpha-L-fucosidase)ELISAKit人αL岩藻糖苷酶

血液糖原酶连续循环反应比色法定量检测试剂盒20次

Mousethyroopin-releasinghormone,HELISAKit小鼠促甲状腺素释放激素(H)检测试剂盒

人韧带成纤维细胞植物茉莉酸甲酯（MeJA）检测试剂盒     试剂盒   组装/原装

植物茉莉酸(JA)检测试剂盒     试剂盒   组装/原装

植物激素脱落酸(ABA)检测试剂盒     试剂盒   组装/原装

植物过氧化物酶（POD）检测试剂盒     试剂盒   组装/原装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况

，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞

。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。