老哥俱乐部

细胞简介
：

输卵管位于人体的盆腔内
，一般的人有两条，左

、右输卵管各位于一侧。它们由底外侧角部向外，平行伸展
，先达卵巢的端，再沿卵巢系膜缘上行至卵巢的输卵管端，且呈弓形而覆盖于卵巢上，然后向下、向内行，终止于卵巢的游离缘及其内侧面上部


。

输卵管是卵子运输、储存、获能
，以及卵母细胞采取
、运送、成熟、受精和早期胚胎发育的重要场所。输卵管与其他空腔器官相似，其管壁由内向外为粘膜层、肌层和浆膜层所构成。其中，肌层的结构和厚度因不同节段而有差异，峡部肌层厚，管腔亦小。输卵管肌层与肌层相连，内层的纵行肌至峡部消失。

细胞特性：

1）细胞来源于手术切除的正常输卵管组织
。

2)细胞鉴定
：平滑肌肌动蛋白（α-SMA）荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1
、 HBV
、HCV
、支原体
、

、酵母和
。

5)细胞生长方式
：梭形细胞，不规则细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 Delf原代平滑肌细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告
：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化

；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃

，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次


，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象

。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品
：

缬含量测试盒

大鼠可溶性髓系细胞触发受体-1(sTREM-1)elisa检测试剂盒

植物线粒体膜蛋白提取试剂盒100T

人谷受体(NMDAR)elisa分析检测试剂盒

PGL3 BASIC＋目的基因

硫酸酯酶修饰因子1抗体  Anti-SUMF1

磷脂酰乙醇胺结合蛋白1抗体  Anti-RKIP/PBP

核苷酸转氢酶抗体  Anti-NNT

胞质紧密粘连蛋白1抗体（闭锁小带蛋白1）  Anti-ZO-1

猫干扰素ω抗体 cat INF ω

末端多聚腺苷酸2蛋白抗体 OGFOD2

FBN3蛋白抗体 FBN3

FITC标记人CD62E/CD62P单克隆抗体 human CD62E/CD62P/FITC

嗅觉受体AI3重组兔单克隆抗体 ORAI3

血小板源性生长因子C抗体 PDGFC

蛋白磷酸酶亩mu抗体 PTP mu

第十七号染色体开放阅读框87抗体 C17orf87

髓易位基因相关蛋白1抗体 MTGR1

调节分化蛋白ROD1抗体 ROD1/PTBP3

Pygopus 2蛋白抗体 Pygopus 2

RAS相关GTP结合蛋白A抗体 RRAGA + RRAGB

21号染色体开放阅读框62抗体 C21ORF62

5号染色体开放阅读框24抗体 C5orf24

肌微管素相关蛋白1抗体 MTMR1

甲基转移酶NSUN5抗体 NSUN5

组织糖原磷酸化酶激酶（GLYCOGEN PHOSPHORYLASE KINASE）活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒

三碘甲状腺原(T3)elisa生化检测试剂盒

Sea Lion Triiodothyronine(T3)ELISA kit

人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)elisa生化检测试剂盒

人输卵管平滑肌细胞CCK-8ELISAKit