老哥俱乐部

细胞简介：

输卵管位于人体的盆腔内，一般的人有两条，左、右输卵管各位于一侧。它们由底外侧角部向外，平行伸展
，先达卵巢的端，再沿卵巢系膜缘上行至卵巢的输卵管端，且呈弓形而覆盖于卵巢上，然后向下、向内行，终止于卵巢的游离缘及其内侧面上部。

粘膜层的上皮为单层高柱状细胞所构成，上皮细胞可分为 4种不同类型：纤毛细胞、分泌细胞、楔形细胞和未分化细胞。输卵管是卵子运输、储存、获能，以及卵母细胞采取、运送
、成熟、受精和早期胚胎发育的重要场所。输卵管上皮细胞体外培养可以用于饲养层细胞，与胚胎共培养

，克服胚胎的发育阻滞现象。

因此，体外培养输卵管上皮细胞，不但可以进一步了解影响生殖微环境变化的因素，而且还可以建立输卵管上皮细胞与胚胎共培养体系，研究输卵管上皮细胞对胚胎体外发育的影响。

细胞特性：

1）细胞来源于人正常输卵管组织

。

2)细胞鉴定
：细胞角蛋白-17（CK-17）荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、
、酵母和。

5)细胞生长方式：上皮样

，多角形细胞，贴壁培养
。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 Delf原代上皮细胞培养体系 作为体外培养的培养基
。

实验报告：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次

，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养


；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下

，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠无翅型MMTV整合位点家族成员5A(W5A)检测试剂盒
，英文名： W5A ELISA Kit

Mouse eosinophil chemotactic protein Eotaxin 1 (Eotaxin 1/CCL11) ELISA Kit 小鼠嗜酸粒细胞趋化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)检测试剂盒

MouseCXC-chemokinereceptor3,CXCR3ELISAKit 小鼠CXC趋化因子受体3(CXCR3)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforHSP-20ELISAKit大鼠热休克蛋白20

细胞MSK1激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitIL-12/P40大鼠白介素12

AGRP重组小鼠 AGRP / AgRP 蛋白 (His 标签) Protein

Adropin蛋白(AD)重组蛋白 Recombinant Adropin (AD)

CCDC47重组人 CCDC47 蛋白 (His 标签) Protein

FGF21 Protein Human 重组人 FGF21 蛋白 (His 标签)

TNF Protein Rat 重组大鼠 TNF-alpha / TNFA 蛋白

Adropin蛋白(AD)重组蛋白 Recombinant Adropin (AD)

FGF21 Protein Human 重组人 FGF21 蛋白 (His 标签)

AGRP重组小鼠 AGRP / AgRP 蛋白 (His 标签) Protein

TNF Protein Rat 重组大鼠 TNF-alpha / TNFA 蛋白

CCDC47重组人 CCDC47 蛋白 (His 标签) Protein

小鼠蛋白激酶B(PKB)ELISA 试剂盒

Rat thrombin aithrombin complex (TAT) ELISA Kit 大鼠抗复合物(TAT)检测试剂盒

HumanBigEndothelin,BigETELISAKit 人大内皮素(BigET)检测试剂盒 进口分装

HumanATP-bindingcassetteanspoerG2,ABCG2检测试剂盒人腺苷三0酸结合盒转运体G2(ABCG2)检测试剂盒

植物源性食品腰果(cashew)试剂盒20次

HumahromboxaneA2,TX-A2ELISAKit人血栓素A2(TX-A2)检测试剂盒

人输卵管上皮细胞C（VC）检测   Vitamin B2 (VB2) detection

B1（VB1）检测   The total amino acid (TAA) detection

B2（VB2）检测   Detection of malic dehydrogenase

总基酸（T－AA）检测   Hydroxyproline sample preeatme

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化

，悬浮细胞直接混匀收集细胞

，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞

，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。