老哥俱乐部

细胞简介：

胰腺为人体内仅次于肝脏的大腺体，是内外分泌混合腺。

胰腺表面覆盖有薄层疏松结缔组织
，并深入腺实质

，这些结缔组织主要由成纤维细胞构成。

细胞特性

：

1）细胞来源于人手术胰腺组织。

2）细胞鉴定：波形蛋白（Vimentin）荧光染色为阳性。

3）经鉴定细胞纯度高于90%。

4）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体
、、酵母和
。

5）细胞生长方式：长梭形，贴壁培养。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 delf原代 成纤维 细胞培养体系 作为该细胞的培养基。

实验报告
：

一

、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5

、差速贴壁1h后
，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1

、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面

，显微镜下观察细胞状态。因运输问题

，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象


。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞

，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠β细胞素(BTC)检测试剂盒
，英文名： BTC ELISA Kit

Mouse esadiol receptor (ER) ELISA Kit 小鼠雌二醇受体(ER)检测试剂盒

ELISA 小鼠核转录因子p65(mouse NF-kBp65)  进口分装

CLIAKitforIL-15ELISAKIT大鼠白介素15

通用型马莱姆症嗜吞噬细胞无形体(LymeandAnaplasmaPhagocytophilum)试剂盒20次

ELISAKitANG-R-Tie1大鼠血管生成素受体Tie1

GREM1重组小鼠 Gremlin 1 / GREM1 蛋白 (His 标签) Protein

蛋白酶激活受体4(PAR4)重组蛋白 Recombinant Protease Activated Receptor 4 (PAR4)

CFL1重组人 CFL1 / N-cofilin 蛋白 (His 标签) Protein

FETUB Protein Human 重组人 Fetuin-B / FETUB 蛋白 (His 标签)

TNFRSF10D Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 TRAIL R4 / CD264 / TNFRSF10D 蛋白 (His 标签)

A Beta1-40 (mutation type, MT 0.1mgA Beta1-40 (mutation type, MT) peptide 突变型β淀粉样肽1-40

FETUB Protein Human 重组人 Fetuin-B / FETUB 蛋白 (His 标签)

CD83重组小鼠 CD83 / HB15 蛋白 (His 标签) Protein

IFNG Protein Rat 重组大鼠 IFNG / Interferon Gamma 蛋白

ABHD14B重组人 ABHD14B 蛋白 (His 标签) Protein

小鼠第八因子相关抗原(FⅧAg)ELISA 试剂盒

Human fetal hemoglobin (HBF) ELISA Kit 人胎儿血红蛋白(HBF)检测试剂盒

HumanHerpessimplexvirus2,HSV-Ag2ELISAKit 人单疱疹病毒抗原2(HSV-Ag2)检测试剂盒 进口分装

Humanarylhydrocarboeceptor,AhR检测试剂盒人芳香烃受体(AhR)检测试剂盒

植物源性食品芥末(mustard)试剂盒20次

Humahymosinα1ELISAKit人肽α1(Thymosinα1)检测试剂盒

人胰腺成纤维细胞无形体核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T

东方体核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T

人疱疹病毒6型(HHV-6)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T

(OC43/HKU1)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T