老哥俱乐部

细胞简介：

硬脑膜是一厚而坚韧的双层膜，主要作用是保护大脑
。外层是颅骨内面的骨膜
，疏松地附于颅盖。内层较外层坚韧
，与硬脊膜在枕骨大孔处续联。成纤维细胞属于由中胚层分化而来的间质细胞。由于这些细胞非常容易培养，它们已经被广泛用于细胞和分子生物学研究中
。

一般而言，成纤维细胞能够分泌 I型和III型胶原等细胞外基质，并且研究表明不同器官中的成纤维细胞有显著的不同
。伤口修复时，真皮成纤维细胞由可增殖，可迁移的表型变为有收缩性的，可重塑基质的表型，同时，它们会分泌大量的透明质酸来应对修复时的炎症反应。

细胞特性：

1）细胞来源于手术切除的脑膜组织。

2）细胞鉴定：纤维连接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）荧光染色为阳性
。

3）经鉴定细胞纯度高于90%
。

4）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体
、、酵母和。

5）细胞生长方式：成纤维样细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 delf原代 成纤维 细胞培养体系 作为该细胞的培养基
。

实验报告：

一

、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织

，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下

，用4% BSA封闭细胞30min；

4

、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1

：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

豚鼠白三烯D4(LTD4)ELISA 试剂盒

Rat angiotensin II (ANG- II) ELISA Kit 大鼠血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)检测试剂盒

humansinglesandedDNAAibody,ssDNAELISAKit 人抗单链DNA抗体/变性DNA抗体(ssDNA)检测试剂盒 进口分装

HumanCyclin-dependekinase7,CDK-7检测试剂盒人周期素依赖性激酶7(CDK-7)检测试剂盒

组织GSK3α激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

HumanPolymorphonuclearElastase,PMNElastaseELISAKit人多形核白细胞弹性蛋白酶(PMNElastase)检测试剂盒

CD274重组大鼠 PD-L1 / B7-H1 / CD274 蛋白 (His 标签) Protein

CREB-1 (cAMP responsive element binding protein-1 0.5mgCREB-1 (cAMP responsive element binding protein-1) 环腺苷酸应答元件结合蛋白(抗原)

CSF3R重组人 G-CSFR / CD114 蛋白 (His 标签) Protein

AK1 Protein Human 重组人 AK1 / Adenylate kinase 1 蛋白 (His 标签)

NTRK3 Protein Mouse 重组小鼠 TrkC / NTRK3 蛋白 (His 标签)

CREB-1 (cAMP responsive element binding protein-1 0.5mgCREB-1 (cAMP responsive element binding protein-1) 环腺苷酸应答元件结合蛋白(抗原)

AK1 Protein Human 重组人 AK1 / Adenylate kinase 1 蛋白 (His 标签)

CD274重组大鼠 PD-L1 / B7-H1 / CD274 蛋白 (His 标签) Protein

NTRK3 Protein Mouse 重组小鼠 TrkC / NTRK3 蛋白 (His 标签)

CSF3R重组人 G-CSFR / CD114 蛋白 (His 标签) Protein

猪白介素12(IL-12)检测试剂盒

Human ai Sp100 aibody (Sp100) ELISA Kit 人抗sp100抗体(sp100)检测试剂盒

PorcineIerleukin18,IL-18ELISAKit 猪白介素18(IL-18)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforAIF(Humanapoptosisinducingfactor)ELISAKit人凋亡诱导因子

血液/活化II(THROMBIN/FACTORIIa)活性荧光定量检测试剂盒20次

MouseUbiquitin,UbELISAKit小鼠泛素蛋白(Ub)检测试剂盒

人硬脑膜成纤维细胞中文名称   方法   规格

大鼠固(ALD)ELISAKit   ELISA. 

大鼠去甲上腺素(NA)ELISAKit   ELISA. 

大鼠前列腺素F(PGF)ELISAKit   ELISA.

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担

。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min

，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿

。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。