老哥俱乐部

细胞简介
：

骨膜是覆盖在骨质表面的一层结缔组织

。骨膜通过夏皮式纤维锚定在骨质上
，充当外部肌肉组织和内部骨质的连接桥梁，这种结构有助于维持骨膜的完整性。

骨膜由两部分组成，外层疏松的纤维层与内层致密的细胞层，纤维层中含有成纤维细胞
、胶原纤维、弹力纤维及微管等。细胞层中多为骨膜源干细胞，这种干细胞与骨髓来源的间充质干细胞类似，具有多向分化的潜能。

骨质修复、重塑和更新与骨膜中的干细胞密切相关。在正常生理状况下
，骨膜组织发挥着维持骨质更新及重塑的作用，其中的干细胞既可以通过膜内成骨方式分化为成骨细胞，也可通过软骨内成骨方式分化为软骨细胞。

细胞特性
：

1） 细胞来源于实验动物正常关节骨膜组织。

2) 细胞鉴定：CD90或CD73荧光染色为阳性。

3) 经鉴定细胞纯度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、、酵母和
。

5) 细胞生长方式：成纤维样细胞

，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 Delf 原代间充质干 细胞 培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min

，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1

：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液


、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况

，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

大鼠横纹肌辅肌动蛋白α(sm Actinin-α)检测试剂盒
，英文名： sm Actinin-α ELISA Kit

Rabbit urokinase type plasminogen activator (uPA) ELISA Kit 兔型纤溶酶原激活物(uPA)检测试剂盒

汉坦病毒Ⅰ型(HTV-Ⅰ)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CLIAKitforMouseClusterofdiffereiation19,CD19ELISAKit小鼠CD19分子

体液氧化酶活性比色法定量检测试剂盒20次

ELISAKit17-OHCS人17羟皮质类固醇

PGLYRP1重组小鼠 PGLYRP1 / PGRP-S 蛋白 (His 标签) Protein

5-LOX (5-lipoxygenase 0.5mg5-LOX (5-lipoxygenase) 5-脂氧合酶抗原

BLOC1S2重组人 BLOC1S2 / BLOS2 蛋白 (GST 标签) Protein

ANP32A Protein Human 重组人 ANP32A / PHAP1 蛋白 (His & GST 标签)

IL1R2 Protein Rat 重组大鼠 IL1R2 / IL1RB / CD121b 蛋白 (His 标签)

低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP1)重组蛋白 Recombinant Low Density Lipoprotein Receptor Related Protein 1 (LRP1)

ANP32A Protein Human 重组人 ANP32A / PHAP1 蛋白 (His & GST 标签)

PRLR重组小鼠 PRLR / Prolactin receptor 蛋白 (His 标签) Protein

TNFSF8 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD153 / CD30L / TNFSF8 蛋白

ATP5D重组人 ATP5D 蛋白 (His 标签) Protein

猪黑色素瘤转移表面黏附分子(MMSAM)ELISA 试剂盒

Human colon cancer aigen (CCA) ELISA Kit 人结肠癌抗原(CCA)检测试剂盒

PorcinesolubleP-selectin,sP-SelectinELISAKit 猪可溶性P选择素(sP-Selectin)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforAlpha-GSTELISAKit大鼠αS转移酶

血液结构型神经元合成酶(cNOS/NOS1/nNOS)活性荧光定量检测试剂盒20次

PlaGibberellicAcid,GAELISAKit植物赤(GA)检测试剂盒

小鼠骨膜干细胞猪超氧化物歧化酶(SOD)ELISAKit   ELISA. 

猪血管性血友病因子/瑞斯托辅因子(VWF)ELISAKit   ELISA. 

猪黑色素瘤转移表面黏附分子(MMSAM)ELISAKit   ELISA. 

猪可溶性血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2/sFLK-1)ELISAKit   ELISA.