檢測原理

犬瘟熱病毒（CDV）ELISA檢測試劑盒試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA） 。往預先包被犬瘟熱病毒（CDV）捕獲抗體的包被微孔中 ，依次加入標本 、標準品 、HRP標記的檢測抗體 ，經過溫育並*洗滌 。用底物TMB顯色 ，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色 ，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色 。顏色的深淺和樣品中的犬瘟熱病毒（CDV）呈正相關 。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值） ，判斷樣品是否含有犬瘟熱病毒（CDV） 。

樣品收集 、處理及保存方法

1.血清 ：使用不含熱原和內毒素的試管 ，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液後 ，3000轉離心10分鍾將血清和紅細胞迅速小心地分離 。

2.血漿 ：EDTA 、檸檬酸鹽或肝素抗凝 。3000轉離心30分鍾取上清 。

3.細胞上清液 ：3000轉離心10分鍾去除顆粒和聚合物 。

4.組織勻漿 ：將組織加入適量生理鹽水搗碎 。3000轉離心10分鍾取上清 。

5.保存 ：如果樣本收集後不及時檢測 ，請按一次用量分裝 ，凍存於-20℃ ，避免反複凍融 ，在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍 。

自備物品

酶標儀（450nm）
高精度加樣器及槍頭 ：0.5-10uL 、2-20uL 、20-200uL 、200-1000uL
37℃恒溫箱

操作注意事項

試劑盒保存在2-8℃ ，使用前室溫平衡20分鍾。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶 ，這屬於正常現象 ，水浴加熱使結晶*溶解後再使用 。
實驗中不用的板條應立即放回自封袋中 ，密封（低溫幹燥）保存 。
預處理後的樣本無需稀釋 ，直接取50μL加樣即可 。
嚴格按照說明書中標明的時間 、加液量及順序進行溫育操作 。
所有液體組分使用前充分搖勻 。

試劑的準備

 20×洗滌緩衝液的稀釋 ：蒸餾水按1 ：20稀釋 ，即1份的20×洗滌緩衝液加19份的蒸餾水 。

洗板方法

  手工洗板 ：甩盡孔內液體 ，每孔加滿洗滌液 ，靜置1min後甩盡孔內液體 ，在吸水紙上拍幹 ，如此洗板5次 。
  自動洗板機 ：每孔注入洗液350μL ，浸泡1min ，洗板5次 。

犬瘟熱病毒（CDV）ELISA檢測試劑盒操作步驟

  從室溫平衡20min後的鋁箔袋中取出所需板條 ，剩餘板條用自封袋密封放回4℃ 。
  設置陰 、陽性對照孔和樣本孔 ，陰 、陽性對照孔中加入陰性對照 、陽性對照各50μL ；
  待測樣本孔先加待測樣本10μL ，再加樣本稀釋液40μL ；
  隨後陰 、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗原100μL ，用封板膜封住反應孔 ，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min 。
  棄去液體 ，吸水紙上拍幹 ，每孔加滿洗滌液 ，靜置1min ，甩去洗滌液 ，吸水紙上拍幹 ，如此重複洗板5次（也可用洗板機洗板） 。
  每孔加入底物A 、B各50μL ，37℃避光孵育15min 。
  每孔加入終止液50μL ，15min內 ，在450nm波長處測定各孔的OD值 。

結果判斷

1.試驗有效性 ：陽性對照孔OD值平均值≥1.00 ；

陰性對照孔OD值平均值≤0.2 。

2.臨界值（Cut off）計算 ：臨界值=陰性對照孔平均值+0.2

3.陰性判斷 ：樣品OD值＜臨界值（Cut off） ，樣品為陰性

4.陽性判斷 ：樣品OD值＞臨界值（Cut off） ，樣品為陽性

試劑盒性能

1.準確性 ：陽性對照孔OD值平均值≥1.00 ；陰性對照孔OD值平均值≤0.15 ，說明試驗結果有效 。

2.特異性 ：不與其它可溶性結構類似物交叉反應 。

3.重複性 ：板內 、板間變異係數均小於15% 。

4.貯藏 ：2-8℃ ，避光防潮保存 。

5.有效期 ：6個月

免責聲明

1.犬瘟熱病毒（CDV）ELISA檢測試劑盒試劑盒僅供研究使用 ，不得用於臨床實驗或人體實驗 ，否則所產生的一切後果 ，由實驗者承擔 ，本公司概不負責 。

2.嚴格按照說明書操作 ，實驗者違反說明書操作 ，後果由實驗者承擔 。

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