實驗原理

本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中人流行性腮腺炎病毒抗體（Mumps-Ab）表達 。用純化的抗原包被微孔板 ，製成固相抗原 ，可與樣品中流行性腮腺炎病毒抗體（Mumps-Ab）相結合 ，經洗滌除去未結合的抗原和其他成分後再與HRP標記的抗原結合 ，形成抗原-抗體-酶標抗原複合物 ，經過*洗滌後加底物TMB顯色 。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色 ，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色 。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值） ，與CUTOFF值相比較 ，從而判定標本中流行性腮腺炎病毒抗體（Mumps-Ab）的存在與否 。

人流行性腮腺炎病毒抗體ELISA試劑盒組成

130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶

2酶標試劑6ml×1瓶8陽性對照0.5ml×1瓶

3酶標包被板12孔×8條9陰性對照0.5ml×1瓶

4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份

5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張

6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個

標本要求

1．標本采集後盡早進行提取 ，提取按相關文獻進行 ，提取後應盡快進行實驗 。若不能馬上進行試驗 ，可將標本放於-20℃保存 ，但應避免反複凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品 ，因NaN3抑製辣根過氧化物酶的（HRP）活性 。

人流行性腮腺炎病毒抗體(Mumps-Ab)ELISA試劑盒操作步驟

1.編號 ：將樣品對應微孔按序編號 ，每板應設陰性對照2孔 、陽性對照2孔 、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑 ，其餘各步操作相同）

2.加樣 ：分別在陰 、陽性對照孔中加入陰性對照 、陽性對照50μl 。然後在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl ，然後再加待測樣品10μl。加樣將樣品加於酶標板孔底部 ，盡量不觸及孔壁 ，輕輕晃動混勻 ，

3.溫育 ：用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾 。

4.配液 ：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用

5.洗滌 ：小心揭掉封板膜 ，棄去液體 ，甩幹，每孔加滿洗滌液 ，靜置30秒後棄去 ，如此重複5次 ，拍幹 。

6.加酶 ：每孔加入酶標試劑50μl ，空白孔除外 。

7.溫育 ：操作同3 。

8.洗滌 ：操作同5 。

9.顯色 ：每孔先加入顯色劑A50μl ，再加入顯色劑B50μl ，輕輕震蕩混勻 ，37℃避光顯色15分鍾.

10.終止 ：每孔加終止液50μl ，終止反應（此時藍色立轉黃色） 。

11.測定 ：以空白空調零 ，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值） 。測定應在加終止液後15分鍾以內進行 。

計算和結果判定 ：

試驗有效性 ：陽性對照孔平均值≥1.00;陰性對照平均值≤0.10

臨界值（CUTOFF）計算 ：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

陰性判定 ：樣品OD值<臨界值（CUTOFF）者為流行性腮腺炎病毒抗體（Mumps-Ab）陰性

陽性判定 ：樣品OD值≥臨界值（CUTOFF）者為流行性腮腺炎病毒抗體（Mumps-Ab）陽性 。

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