操作步骤：
1. 标准品的稀释与加样 ：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在di一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在di一 、第二孔中加标准品稀释液50μl ，混匀；然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三 、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五 、第六孔中 ，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五 、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl ，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中 ，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为180 ng/L ，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂 ，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍） 。加样将样品加于酶标板孔底部 ，尽量不触及孔壁 ，轻轻晃动混匀 。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5. 洗涤 ：小心揭掉封板膜 ，弃去液体，甩干 ，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次 ，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl ，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色 ：每孔先加入显色剂A50μl ，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀 ，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。
11. 测定 ：以空白空调零 ，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值） 。 测定应在加终止液后15分钟。
人乳腺癌细胞；MDA-MB-231
人乳腺癌细胞；MDA-MB-435S
人乳腺癌细胞 ；MDA-MB-453
人恶性多发性畸胎瘤细胞；NTERA-2
人卵巢畸胎瘤细胞 ；PA-1
人胰腺癌细胞 ；PANC-1
人成骨肉瘤细胞 ；Saos-2
人神经母细胞瘤细胞；SH-SY5Y
人卵巢腺癌细胞；SK-OV-3
人骨肉瘤细胞；U-2 OS [U2OS ；U2-OS；U-2OS]
人横纹肌肉瘤细胞；A-204
人肺腺癌细胞；Calu-3
人肾癌Wilms细胞；G401
人肝癌细胞 ；Hep G2 [HepG2]
人急性早幼粒白血病细胞 ；HL-60
人骨肉瘤细胞 ；HOS
人慢性髓系白血病细胞；K562
人前列腺癌细胞 ；LNCaP
人乳腺癌细胞；MCF 7B
人急性淋巴母细胞性白血病细胞；MOLT-4
人小细胞肺癌细胞；NCI-H209
黑人Burkitt淋巴瘤细胞；RAJI
人B淋巴细胞瘤细胞 ；RAMOS
人B淋巴细胞瘤细胞；RAMOS(RA.1)
人脑瘤细胞；SF126
人脑瘤细胞 ；SF763
人脑瘤细胞；SF767
人皮肤黑色素瘤细胞 ；SK-MEL-1
人肾上腺皮质癌细胞；SW-13
人结直肠癌细胞；T84
人急性单核细胞白血病细胞 ；THP-1
人神经胶质细胞瘤细胞；U251
人组织细胞淋巴瘤细胞 ；U937 [U-937]
人胃腺癌细胞 ；BGC-823
人低分化肺腺癌细胞 ；GLC-82 [GLC82]
人喉癌上皮细胞；Hep-2
人纤维肉瘤细胞；HT-1080
人绒癌细胞；JEG-3
人耐VP16绒癌细胞株；JEG-3/VP16
白介素-2转染耐VP16绒癌细胞 ；JEG-3/VP16-IL-2
TNFa转染耐VP16绒癌细胞 ；JEG-3-VP16-TNFa
人急性T淋巴细胞白血病细胞；Jurkat, Clone E6-1
人神经母细胞瘤细胞；BE(2)-M17
人乳腺癌细胞 ；MDA-MB-157
人成骨肉瘤细胞；MG-63
人小细胞肺癌细胞 ；NCI-H446
人多发性骨髓瘤细胞 ；RPMI-8226 [RPMI8826]