雙抗體夾心法:

1.包被 ：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩衝液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg/ml 。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml ，4℃ 過夜 。次日 ，棄去孔內溶液 ，用洗滌緩衝液洗3次 ，每次3分鍾 。（簡稱洗滌，下同） 。
2. 加樣 ：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml於上述已包被之反應孔中 ，置37℃ 孵育1小時 。然後洗滌 。（同時做空白孔 ，陰性對照孔及陽性對照孔） 。
3. 加酶標抗體 ：於各反應孔中 ，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經滴定後的稀釋度）0.1ml 。37℃ 孵育0.5～1小時 ，洗滌 。
4. 加底物液顯色 ：於各反應孔中加入臨時配製的TMB底物溶液0.1ml ，37℃ 10～30分鍾 。
5. 終止反應 ：於各反應孔中加入2M硫酸0.05ml 。
6. 結果判定 ：可於白色背景上 ，直接用肉眼觀察結果 ：反應孔內顏色越深 ，陽性程度越強 ，陰性反應為無色或極淺 ，依據所呈顏色的深淺 ，以“+” 、“-”號表示 。也可測OD值 ：在ELISA檢測儀上，於450nm（若以ABTS顯色 ，則410nm）處 ，以空白對照孔調零後測各孔OD值 ，若大於規定的陰性對照OD值的2.1倍 ，即為陽性 。

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