双抗体夹心法:
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日 ，弃去孔内溶液 ，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤 ，下同）。
2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时 。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔） 。
3. 加酶标抗体 ：于各反应孔中 ，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤 。
4. 加底物液显色 ：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果 ：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+” 、“-”号表示 。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色 ，则410nm）处 ，以空白对照孔调零后测各孔OD值 ，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍 ，即为阳性。
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