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米黑根毛黴PCR檢測試劑盒準備試劑與收集血樣
點擊次數 :586 更新時間 :2021-04-13

準備試劑與收集血樣 :

雙重核酸試劑盒(熒光PCR法) 1.  收集標本 :血清 、血漿(EDTA  、檸檬酸鹽 、肝素抗凝) 、細胞培養上清液 、組織勻漿等盡早檢測 , 2-8 ℃ 保存48 小時 ;更長時間須冷凍( -20   ℃或 -70   ℃ )保存 ,避免反複凍融 。
2.  標準品液配製 :使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻 ,配成 120 0ng/ml 的溶液  。 設標準 管 8 管 ,管加標本稀釋液 900ul  ,第二至第八管加入標本稀釋液 500ul  。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻後用加樣器吸出 500ul  ,移至第二管  。如此反複作對倍稀釋 ,從第七 管 中吸出 500ul 棄去 。第八 管 為空白對照。
3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋( 示例 : 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水) 。
4.  洗滌液 :用重蒸水 1:20 稀釋(示例 :1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)
檢測程序 :
1.  加樣 :每孔各加入標準品或待測樣品 100ul  ,將反應板充分混勻後置 37 ℃ 120 分鍾 。
2.  洗板 :用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次 ,向濾紙上印幹 。
3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul  。將反應板充分混勻後置 37 ℃ 6 0 分鍾 。
4.  洗板 :同前 。
5.  每孔加酶標抗體工作液100ul  。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鍾 。
6.  洗板 :同前 。
7.  每孔加入底物工作液100ul  ,置 37   ℃ 暗處反應15 分鍾 。
8.  每孔加入100ul 終止液混勻 。
9.  30分鍾內用酶標儀在 45 0 nm 處測 吸光值 。
性能 :
1. 準確性 :標準品線性回歸與預期濃度相關係數R值 ,大於等於0.9900 。
2. 靈敏度 :檢測濃度小於0.1 U/mL 。
3. 特異性 :不與其它可溶性結構類似物交叉反應 。
4. 重複性 :板內 、板間變異係數均小於15%。
5. 貯藏 :2-8℃ ,避光防潮保存 。
6. 有效期 :6個月

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