實驗步驟 :
①產品僅用於科研取凍存已裂解的細胞
,室溫放置5分鍾使其*溶解
。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang
,蓋緊管蓋
。手動劇烈振蕩管體15秒後
,15到30℃孵育2到3分鍾
。4℃下12000rpm離心15分鍾
。離心後混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相
,中間層以及無色水相上層
。RNA全部被分配於水相中
。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%
。
③RNA沉澱 將水相上層轉移到一幹淨無RNA酶的離心管中
。加等體積異丙醇混合以沉澱其中的RNA
,混勻後15到30℃孵育10分鍾後
,於4℃下12000rpm 離心10分鍾
。此時離心前不可見的RNA沉澱將在管底部和側壁上形成膠狀沉澱塊
。
④RNA清洗 移去上清液
,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配製)
,清洗RNA沉澱
。混勻後
,4℃下7000rpm離心5分鍾
。
⑤RNA幹燥 小心吸去大部分乙醇溶液
,使RNA沉澱在室溫空氣中幹燥5-10分鍾
。
⑥溶解RNA沉澱 溶解RNA時
,先加入無RNA酶的水40μl用槍反複吹打幾次
,使其*溶解
,獲得的RNA溶液保存於-80℃待用
。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零
。然後取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)後
,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值
,測定RNA溶液 濃度和純度
。
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