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      口腔支原体PCR检测试剂盒实验步骤
      点击次数:1006 更新时间 :2021-04-08

      实验步骤 :

      ①产品仅用于科研取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其*溶解 。
      ②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang ,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟 。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相,中间层以及无色水相上层 。RNA全部被分配于水相中 。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60% 。
      ③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
      ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。
      ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液 ,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
      ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时 ,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其*溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用 。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零 。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后 ,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值 ,测定RNA溶液 浓度和纯度。

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