老哥俱乐部

          PCR完成后，建议将反应液于1000× g (大约4000 rpm) 离心1～3 min以沉淀血细胞碎片，之后取上清进行下游分析
。该步骤可有效去除多种血液组分。当使用高浓度血液模板时此步尤为重要，因为经过PCR循环，反应管中会存在大量的血细胞碎片。这些碎片会干扰下游的检测，如琼脂糖电泳检测。注意：由于血液本身的原因，PCR 结束后在 PCR 管的底部会出现透明凝胶状物质，此为正常现象。

对照反应

在PCR结果分析时，不管是阳性结果或阴性结果，如果没有对照反应，都不能确定结果是否可靠
。为了便于后续实验结果的分析，建议在进行PCR时，设置阳性和阴性PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰
。

a）模板DNA
：选用样本纯化的DNA。

b）引物的选择
：建议选择该样本较易扩增的基因的引物，如 β-actin 基因或 GAPDH 等。

4.2 阴性对照

PCR反应体系被污染会导致PCR结果出现假阳性，需要设置阴性对照来排除。将使用的移液器枪头浸泡在2× Blood Master Mix中

，添加引物
，ddH2O进行PCR扩增；另取ddH2O作为模板
，用目的基因引物进行PCR扩增，以排除PCR体系是否被污染和实验是否有其他污染源。

上一篇 OVA sIgG elisa酶联免疫试剂盒实验中操作步骤： 下一篇 无浆体通用PCR检测试剂盒组成及试剂配制