温和气单胞菌PCR试剂盒反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶 、dNTP、模板和Mg2+
引物 ：引物是PCR特异性反应的关键 ，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上 ，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增 。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度 ： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜 ，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基 ：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳 ，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布 ，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补 ，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败 。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量 ：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol ，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增 ，且可增加引物之间形成二聚体的机会。
组成及试剂配制:
1 、酶标板 ：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟 ，同时反复颠倒/搓动以助溶解 ，其浓度为200 U/L ，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释） ，分别配制成200 U/L ，100 U/L，50 U/L，25 U/L ，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3 、 样品稀释液：1×20ml。
4 、 检测稀释液A ：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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